利用CXCR-4基因轉(zhuǎn)染促進(jìn)神經(jīng)樣BMSCs在脊髓損傷鼠體內(nèi)定向遷移的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：(1)分離培養(yǎng)、鑒定及GFP標(biāo)記小鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞并在體外向神經(jīng)樣細(xì)胞誘導(dǎo)分化；(2)構(gòu)建小鼠胸10脊髓損傷模型，并對(duì)其進(jìn)行CXCR-4基因轉(zhuǎn)染的神經(jīng)樣BMSCs移植；(3)對(duì)BMSCs在脊髓損傷部位的定向歸巢情況及脊髓神經(jīng)的再生功能進(jìn)行檢測(cè)。 方法：(1)經(jīng)密度離心法從C57BL/6小鼠骨髓內(nèi)分離培養(yǎng)BMSCs，并通過(guò)向成骨樣細(xì)胞、脂肪樣細(xì)胞分化證明其具有多向分化能力，利用流式細(xì)胞儀檢測(cè)其細(xì)胞表面標(biāo)志物CD44和CD3

2、4的表達(dá)，利用腺病毒載體轉(zhuǎn)染GFP基因，并在體外實(shí)現(xiàn)其向神經(jīng)樣細(xì)胞的誘導(dǎo)分化。(2)利用脊髓橫切法構(gòu)建小鼠胸10脊髓損傷模型，實(shí)驗(yàn)組通過(guò)尾靜脈注射經(jīng)過(guò)CXCR-4腺病毒載體轉(zhuǎn)染的BMSCs懸液，對(duì)照組分別選擇未行基因轉(zhuǎn)染的BMSCs懸液及無(wú)細(xì)胞的培養(yǎng)基進(jìn)行尾靜脈注射。(3)利用免疫組化、激光共聚焦顯微鏡方法在移植術(shù)后的不同時(shí)相點(diǎn)檢測(cè)脊髓損傷部位組織GFP陽(yáng)性細(xì)胞占所有細(xì)胞的比例、來(lái)源于BMSCs的神經(jīng)樣細(xì)胞占全部移植細(xì)胞的比例，判斷經(jīng)過(guò)

3、CXCR-4腺病毒載體轉(zhuǎn)染的神經(jīng)樣BMSCs在鼠體內(nèi)定向趨化的能力及其在修復(fù)損傷脊髓中的作用；并利用BBB法評(píng)估其神經(jīng)運(yùn)動(dòng)功能的恢復(fù)情況。 結(jié)果：(1)分離培養(yǎng)的BMSCs呈克隆樣生長(zhǎng)，經(jīng)成骨誘導(dǎo)培養(yǎng)后出現(xiàn)鈣沉積，經(jīng)成脂肪誘導(dǎo)后形成脂肪滴，經(jīng)轉(zhuǎn)染標(biāo)記后約80％呈GFP陽(yáng)性，經(jīng)神經(jīng)樣細(xì)胞誘導(dǎo)后出現(xiàn)細(xì)胞形態(tài)變化及表達(dá)NSE(+)；(2)造模后，絕大多數(shù)小鼠出現(xiàn)明顯截癱(BBB<4分)，術(shù)后7天對(duì)隨機(jī)分組的小鼠順利實(shí)施尾靜脈細(xì)胞移植；

4、(3)移植術(shù)后各時(shí)相點(diǎn)，實(shí)驗(yàn)組脊髓損傷局部GFP陽(yáng)性BMSCs數(shù)量逐漸增多，且增多幅度明顯高于對(duì)照組；來(lái)源于BMSCs的神經(jīng)樣細(xì)胞占全部移植細(xì)胞的比例(分化率)辦高于對(duì)照組；小鼠神經(jīng)運(yùn)動(dòng)功能明顯恢復(fù)。 結(jié)論：(1)通過(guò)密度離心法可以從C57BL/6小鼠骨髓內(nèi)獲取的BMSCs，經(jīng)腺病毒載體轉(zhuǎn)染GFP基因后絕大部分呈現(xiàn)GFP陽(yáng)性，并實(shí)現(xiàn)體外向神經(jīng)樣細(xì)胞的誘導(dǎo)分化；(2)成功構(gòu)建起小鼠脊髓損傷模型，并經(jīng)尾靜脈實(shí)施細(xì)胞移植；(3)經(jīng)過(guò)C