印度酸橘CrNCED1基因的功能驗證.pdf

1、柑橘是我國南方的重要經(jīng)濟作物，而逆境脅迫特別是干旱制約著柑橘的生產(chǎn)。脫落酸(ABA)在植物應(yīng)對逆境脅迫中起著積極的作用。通過改變ABA生物合成過程中關(guān)鍵酶基因的表達(dá)，從而提高植物內(nèi)源ABA水平是增強植物抗逆性的一個重要手段。
　　 9-順式-環(huán)氧類胡蘿卜素雙加氧酶(NCED)是一個ABA合成中起關(guān)鍵作用的酶，影響著植物體內(nèi)ABA的積累。本研究在已經(jīng)獲得轉(zhuǎn)CrNCED1基因煙草的基礎(chǔ)上，對轉(zhuǎn)基因煙草和野生型煙草在逆境脅迫下的抗性進(jìn)

2、行分析，研究CrNCED1基因在植物生長和應(yīng)對逆境脅迫中的功能，得到如下結(jié)果：
　　 1.對轉(zhuǎn)CrNCED1基因煙草T2代進(jìn)行Kan抗性篩選和PCR鑒定，得到了8個純合的轉(zhuǎn)基因株系，分別是C5-3、C5-5、C5-6、C7-1、C7-4、C7-7、C9-4、C9-5。對其中6個轉(zhuǎn)基因株系和野生型的CrNCED1基因表達(dá)量進(jìn)行檢測，結(jié)果表明CrNCED1基因在轉(zhuǎn)基因煙草中都有不同程度的表達(dá)，而對照野生型中沒有表達(dá)。選取CrNCED

3、1基因表達(dá)量較高的3個轉(zhuǎn)基因株系C5-6、C7-4和C9-4進(jìn)行CrNCED1基因的功能驗證。
　　 2.在幼苗期，轉(zhuǎn)CrNCED1基因煙草根生長比野生型慢。對純合株系C5-6、C7-4和C9-4進(jìn)行ABA敏感性試驗，結(jié)果表明在含ABA的培養(yǎng)基上，轉(zhuǎn)基因煙草根生長比野生型快，ABA對轉(zhuǎn)基因煙草根的生長抑制作用較小。
　　 3.對轉(zhuǎn)CrNCED1基因煙草和非轉(zhuǎn)基因煙草進(jìn)行脫水處理、干旱脅迫處理、葉圓片的鹽和過氧化氫處理，結(jié)