耐有機溶劑脂肪酶產生菌篩選及粗酶性質研究.pdf

1、脂肪酶主要用于生產高價值的產品。有機介質中活性降低成為制約其工業(yè)產業(yè)化的一個重要因素。因此耐有機溶劑脂肪酶在理論和工業(yè)應用上具有雙重意義，是近年來國內外研究的熱點。
　　 本文篩選到了一株有機溶劑耐受菌，所產脂肪酶在有機溶劑中具有高活性。對該菌進行菌種鑒定，研究了培養(yǎng)條件對其產酶的影響及粗酶性質。
　　 從油污土樣和石化污水中篩選到一株產脂肪酶的有機溶劑耐受菌，結合Biolog微生物自動鑒定系統(tǒng)和16S rDNA法基因組

2、序列分析結果，菌株LP8被鑒定為Pseudomonas aeruginosa，命名為P.aeruginosa L，P8。
　　 研究了多種因素對菌株P.aeruginosa LP8產脂肪酶的影響。其優(yōu)化培養(yǎng)基組成為(g/L)：葡萄糖5，尿素5，K2HPO42，KCl0.5，MgSO4·7H2O0.5，玉米漿15(mL/L)，葵花子油5(mL/L)，pH7.0。；利用該培養(yǎng)基，在30℃，搖床轉速200 r/m，250mL三角瓶中裝

3、液量為50mL，培養(yǎng)P.aeruginosa LP8，發(fā)酵40h，酶活力可達到6.41U/mL，比優(yōu)化前提高了89％。
　　 P.aeruginosa LP8所產脂肪酶(脂肪酶LP8)粗酶液在較寬的pH范圍內(7.0-9.5)具有高活力，最適合反應pH為8.0，儲存穩(wěn)定pH為7.0；該脂肪酶對溫度較為敏感，最適反應溫度為40℃，在40℃以下穩(wěn)定性較好。金屬離子鏊合劑EDTA和多種金屬離子對該酶活性沒有顯著影響，表明該酶是非金屬酶

4、。
　　 多種親水及疏水性有機溶劑(log P值介于-1.35和7.5)能夠促進脂肪酶LP8的活力，尤其是乙醇、DMSO、癸烷和十四烷顯著提高脂肪酶LP8的活性。僅有乙腈、異丙醇、正丁醇和甲苯對該脂肪酶有一定的抑制作用。
　　 脂肪酶LP8顯示了很強的耐受親水性有機溶劑的能力，對DMSO、甲醇、乙醇和DMF的最大耐受濃度分別達到60％、50％、50％和40％(v/v)。
　　 三種疏水性有機溶劑能顯著提高脂肪酶L

5、P8的活力和穩(wěn)定性。在環(huán)己烷、正庚烷和十四烷體系中，脂肪酶LP8最高活力分別達到了初始酶活的3.5，3.0和9.6倍，并在20天內保持較高水平。而無有機溶劑添加的原酶半衰期僅為4天。
　　 本研究通過自行篩選獲得一株具有自主知識產權的耐有機溶劑脂肪酶產生菌Pseudomonas aeruginosa LP8。該菌株所產脂肪酶具有優(yōu)異的有機溶劑耐受性，可望在親水性有機溶劑-水的均相體系及疏水性有機溶劑-水的雙水相體系的催化反應中有