耐有機溶劑脂肪酶產(chǎn)生菌篩選及粗酶性質(zhì)研究.pdf

1、脂肪酶主要用于生產(chǎn)高價值的產(chǎn)品。有機介質(zhì)中活性降低成為制約其工業(yè)產(chǎn)業(yè)化的一個重要因素。因此耐有機溶劑脂肪酶在理論和工業(yè)應(yīng)用上具有雙重意義，是近年來國內(nèi)外研究的熱點。
　　 本文篩選到了一株有機溶劑耐受菌，所產(chǎn)脂肪酶在有機溶劑中具有高活性。對該菌進行菌種鑒定，研究了培養(yǎng)條件對其產(chǎn)酶的影響及粗酶性質(zhì)。
　　 從油污土樣和石化污水中篩選到一株產(chǎn)脂肪酶的有機溶劑耐受菌，結(jié)合Biolog微生物自動鑒定系統(tǒng)和16S rDNA法基因組

2、序列分析結(jié)果，菌株LP8被鑒定為Pseudomonas aeruginosa，命名為P.aeruginosa L，P8。
　　 研究了多種因素對菌株P(guān).aeruginosa LP8產(chǎn)脂肪酶的影響。其優(yōu)化培養(yǎng)基組成為(g/L)：葡萄糖5，尿素5，K2HPO42，KCl0.5，MgSO4·7H2O0.5，玉米漿15(mL/L)，葵花子油5(mL/L)，pH7.0。；利用該培養(yǎng)基，在30℃，搖床轉(zhuǎn)速200 r/m，250mL三角瓶中裝

3、液量為50mL，培養(yǎng)P.aeruginosa LP8，發(fā)酵40h，酶活力可達到6.41U/mL，比優(yōu)化前提高了89％。
　　 P.aeruginosa LP8所產(chǎn)脂肪酶(脂肪酶LP8)粗酶液在較寬的pH范圍內(nèi)(7.0-9.5)具有高活力，最適合反應(yīng)pH為8.0，儲存穩(wěn)定pH為7.0；該脂肪酶對溫度較為敏感，最適反應(yīng)溫度為40℃，在40℃以下穩(wěn)定性較好。金屬離子鏊合劑EDTA和多種金屬離子對該酶活性沒有顯著影響，表明該酶是非金屬酶

4、。
　　 多種親水及疏水性有機溶劑(log P值介于-1.35和7.5)能夠促進脂肪酶LP8的活力，尤其是乙醇、DMSO、癸烷和十四烷顯著提高脂肪酶LP8的活性。僅有乙腈、異丙醇、正丁醇和甲苯對該脂肪酶有一定的抑制作用。
　　 脂肪酶LP8顯示了很強的耐受親水性有機溶劑的能力，對DMSO、甲醇、乙醇和DMF的最大耐受濃度分別達到60％、50％、50％和40％(v/v)。
　　 三種疏水性有機溶劑能顯著提高脂肪酶L

5、P8的活力和穩(wěn)定性。在環(huán)己烷、正庚烷和十四烷體系中，脂肪酶LP8最高活力分別達到了初始酶活的3.5，3.0和9.6倍，并在20天內(nèi)保持較高水平。而無有機溶劑添加的原酶半衰期僅為4天。
　　 本研究通過自行篩選獲得一株具有自主知識產(chǎn)權(quán)的耐有機溶劑脂肪酶產(chǎn)生菌Pseudomonas aeruginosa LP8。該菌株所產(chǎn)脂肪酶具有優(yōu)異的有機溶劑耐受性，可望在親水性有機溶劑-水的均相體系及疏水性有機溶劑-水的雙水相體系的催化反應(yīng)中有