PAK5-Egr1-MMP2信號(hào)通路對(duì)乳腺癌細(xì)胞遷移和侵襲的影響.pdf

1、目的：研究p21-activated kinase5（PAK5）對(duì)乳腺癌細(xì)胞增殖、凋亡、遷移及侵襲的影響及其分子機(jī)制。
　　方法：采用MDA-MB-231和BT-549乳腺癌細(xì)胞株。體外化學(xué)合成PAK5基因序列特異性小干擾PAK5 siRNA。PAK5 siRNA轉(zhuǎn)染乳腺癌細(xì)胞后采用WesternBlot檢測(cè)PAK5蛋白表達(dá)的改變;CCK-8細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)檢測(cè)下調(diào)PAK5對(duì)細(xì)胞增殖能力的影響;流式細(xì)胞儀檢測(cè)兩種乳腺癌細(xì)胞周期的變化;

2、Annexin V-FITC/PI法檢測(cè)PAK5對(duì)細(xì)胞凋亡的影響;劃痕試驗(yàn)、Transwell細(xì)胞遷移和侵襲實(shí)驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞遷移和侵襲能力的變化;進(jìn)一步通過Western Blot檢測(cè)轉(zhuǎn)染PAK5 siRNA后細(xì)胞中細(xì)胞周期蛋白、細(xì)胞周期蛋白依賴性激酶抑制劑、早期生長(zhǎng)反應(yīng)因子1（Egr-1）及基質(zhì)金屬蛋白酶2（MMP2）的表達(dá)。明膠酶譜實(shí)驗(yàn)檢測(cè)下調(diào)PAK5對(duì)乳腺癌細(xì)胞分泌基質(zhì)金屬蛋白酶(MMPs)的影響。
　　結(jié)果：與對(duì)照組相比，PA

3、K5 siRNA組PAK5的蛋白表達(dá)明顯下降;CCK-8細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)檢測(cè)結(jié)果顯示，PAK5 siRNA轉(zhuǎn)染后細(xì)胞的增殖速度明顯減慢，其中在72和96小時(shí)最明顯;下調(diào)PAK5后處于G1期的乳腺癌細(xì)胞比例明顯增加，而對(duì)照組G1期細(xì)胞比例無明顯增加，其中在48小時(shí)最明顯;Annexin V-FITC/PI法檢測(cè)結(jié)果提示，阻斷MDA-MB-231和BT-549細(xì)胞中PAK5基因的表達(dá)可以誘發(fā)一定程度的凋亡;Western Blot檢測(cè)結(jié)果顯示凋

4、亡相關(guān)蛋白PARP、pre-caspase8及pre-caspase3的表達(dá)量明顯減少;遷移實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，MDA-MB-231和BT-549細(xì)胞的遷移能力與對(duì)照組相比分別下降了40％和45％;侵襲實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，MDA-MB-231和BT-549細(xì)胞的侵襲能力與對(duì)照組相比分別下降了23％和48％;Western Blot檢測(cè)結(jié)果顯示轉(zhuǎn)染組乳腺癌細(xì)胞中的CyclinD1的蛋白表達(dá)量明顯減少，而p21的蛋白表達(dá)量明顯增加;PAK5 siRNA

5、轉(zhuǎn)染后導(dǎo)致MMP2蛋白表達(dá)量明顯減少，Egr-1的表達(dá)明顯增加。
　　結(jié)論：沉默PAK5基因表達(dá)可下調(diào)Cyclin D1蛋白的表達(dá)，同時(shí)上調(diào)p21蛋白的表達(dá)，并使細(xì)胞停滯在G1期，最終抑制細(xì)胞的增殖。阻斷PAK5基因的表達(dá)可以下調(diào)凋亡相關(guān)蛋白PARP、pre-caspase8及pre-caspase3的表達(dá)，進(jìn)一步誘發(fā)一定程度的凋亡。下調(diào)PAK5后通過上調(diào)Egr-1的表達(dá)、抑制MMP-2的表達(dá)，從而抑制乳腺癌細(xì)胞的遷移和侵襲能力。