PAK5-Egr1-MMP2信號通路對乳腺癌細胞遷移和侵襲的影響.pdf

1、目的：研究p21-activated kinase5（PAK5）對乳腺癌細胞增殖、凋亡、遷移及侵襲的影響及其分子機制。
　　方法：采用MDA-MB-231和BT-549乳腺癌細胞株。體外化學合成PAK5基因序列特異性小干擾PAK5 siRNA。PAK5 siRNA轉染乳腺癌細胞后采用WesternBlot檢測PAK5蛋白表達的改變;CCK-8細胞增殖實驗檢測下調PAK5對細胞增殖能力的影響;流式細胞儀檢測兩種乳腺癌細胞周期的變化;

2、Annexin V-FITC/PI法檢測PAK5對細胞凋亡的影響;劃痕試驗、Transwell細胞遷移和侵襲實驗檢測細胞遷移和侵襲能力的變化;進一步通過Western Blot檢測轉染PAK5 siRNA后細胞中細胞周期蛋白、細胞周期蛋白依賴性激酶抑制劑、早期生長反應因子1（Egr-1）及基質金屬蛋白酶2（MMP2）的表達。明膠酶譜實驗檢測下調PAK5對乳腺癌細胞分泌基質金屬蛋白酶(MMPs)的影響。
　　結果：與對照組相比，PA

3、K5 siRNA組PAK5的蛋白表達明顯下降;CCK-8細胞增殖實驗檢測結果顯示，PAK5 siRNA轉染后細胞的增殖速度明顯減慢，其中在72和96小時最明顯;下調PAK5后處于G1期的乳腺癌細胞比例明顯增加，而對照組G1期細胞比例無明顯增加，其中在48小時最明顯;Annexin V-FITC/PI法檢測結果提示，阻斷MDA-MB-231和BT-549細胞中PAK5基因的表達可以誘發(fā)一定程度的凋亡;Western Blot檢測結果顯示凋

4、亡相關蛋白PARP、pre-caspase8及pre-caspase3的表達量明顯減少;遷移實驗結果顯示，MDA-MB-231和BT-549細胞的遷移能力與對照組相比分別下降了40％和45％;侵襲實驗結果顯示，MDA-MB-231和BT-549細胞的侵襲能力與對照組相比分別下降了23％和48％;Western Blot檢測結果顯示轉染組乳腺癌細胞中的CyclinD1的蛋白表達量明顯減少，而p21的蛋白表達量明顯增加;PAK5 siRNA

5、轉染后導致MMP2蛋白表達量明顯減少，Egr-1的表達明顯增加。
　　結論：沉默PAK5基因表達可下調Cyclin D1蛋白的表達，同時上調p21蛋白的表達，并使細胞停滯在G1期，最終抑制細胞的增殖。阻斷PAK5基因的表達可以下調凋亡相關蛋白PARP、pre-caspase8及pre-caspase3的表達，進一步誘發(fā)一定程度的凋亡。下調PAK5后通過上調Egr-1的表達、抑制MMP-2的表達，從而抑制乳腺癌細胞的遷移和侵襲能力。