絲裂原活化蛋白激酶信號(hào)途徑在原發(fā)性高血壓中分子機(jī)制和干預(yù)研究.pdf

1、本課題共分為三個(gè)部分:
　　 第一部分:不同年齡高血壓大鼠血管平滑肌中細(xì)胞外信號(hào)調(diào)節(jié)激酶途徑的表達(dá)。
　　 目的:
　　 研究不同年齡的自發(fā)性高血壓大鼠(SHR)和Wistar Kyoto大鼠(WKY)主動(dòng)脈平滑肌中細(xì)胞外調(diào)節(jié)激酶(ERK)及其磷酸酶(MKP-1)的表達(dá)及其與高血壓的關(guān)系。
　　 方法:
　　 1、用tail-cuff測量大鼠尾動(dòng)脈血壓；
　　 2、用免疫沉淀法測定大鼠胸主

2、動(dòng)脈血管平滑肌中ERK活性；
　　 3、用Western印跡方法檢測大鼠胸主動(dòng)脈血管平滑肌中總ERK(t-ERK)、磷酸化ERK(p-ERK)以及絲裂原活化蛋白激酶磷酸酶-1(MKP-1)水平；
　　 4、用RT-PCR法測定大鼠胸主動(dòng)脈血管平滑肌中MKP-1 mRNA水平。
　　 結(jié)果:
　　 1、SHR的血壓自8周齡起明顯高于WKY(P<0.01),且隨年齡增長而升高(P<0.05)至14周以后趨于穩(wěn)

3、定；
　　 2、SHR主動(dòng)脈平滑肌中的p-ERK表達(dá)和ERK活性明顯高于同年齡的WKY(P<0.01),隨年齡增長而遞增(P<0.05),與血壓呈正相關(guān)；
　　 3、各年齡組SHR與相同周齡WKY大鼠t-ERK水平比較均無明顯差異(P>0.05)
　　 4、SHR主動(dòng)脈平滑肌中MKP-1蛋白及mRNA的表達(dá)明顯高于同齡WKY,在5周齡時(shí)明顯高于WKY,之后均隨年齡的增長而遞減(P<0.05),與血壓和ERK呈負(fù)相

4、關(guān),而WKY下降不明顯。
　　 結(jié)論:
　　 MKP-1在高血壓的發(fā)生和發(fā)展過程中起重要作用,其表達(dá)逐漸下降可能是導(dǎo)致ERK激活增加,從而導(dǎo)致血管平滑肌細(xì)胞增殖,血壓升高的重要原因。
　　 第二部分:苯那普利、氯沙坦、卡維地洛和胼屈嗪對(duì)高血壓大鼠血管ERK途徑的影響。
　　 目的:
　　 探討苯那普利,氯沙坦,卡維地洛和肼屈嗪對(duì)SHR胸主動(dòng)脈平滑肌中ERK途徑的影響。
　　 方法:

5、　　 1、選擇同周齡WKY大鼠作正常對(duì)照,將35只14周齡雄性SHR隨機(jī)分成5組:模型組、苯那普利組(10 mg·kg-1·d-1)、氯沙坦組(10 mg·kg-1·d-1),卡維地洛組(30 mg·kg-1·d-1)和肼屈嗪組(10 mg·kg-1·d-1),喂養(yǎng)10周。
　　 2、大鼠胸主動(dòng)脈血管平滑肌中ERK活性、t-ERK、p-ERK以及MKP-1蛋白水平測定方法同第一部分。
　　 結(jié)果:
　　 1、喂

6、養(yǎng)10周后,苯那普利組、氯沙坦組、卡維地洛組和肼屈嗪組血壓相似,均顯著低于模型組(n=7,P<0.01)。
　　 2、6組大鼠t-ERK水平無顯著性差異(n=7,P>0.05)；
　　 3、苯那普利組、氯沙坦組、卡維地洛組和WKY組胸主動(dòng)脈血管平滑肌中ERK活性.p-ERK,MKP-1和p-ERK／t-ERK比值水平無差異(n=7,P>0.05),顯著低于肼屈嗪組和模型組(n=7,P<0.05)。
　　 4、肼屈

7、嗪組和模型組大鼠胸主動(dòng)脈ERK活性、p-ERK、MKP-1和p-ERK／t-ERK比值水平無差異(n=7,P>0.05)。
　　 結(jié)論:
　　 SHR胸主動(dòng)脈ERK活性程度和MKP-1水平增加；苯那普利、氯沙坦和卡維地洛可降低SHR胸主動(dòng)脈血管平滑肌中ERK活性程度和MKP-1水平,肼屈嗪卻不能,提示苯那普利、氯沙坦和卡維地洛主要不是通過降壓作用影響ERK途徑。
　　 第三部分:血管緊張素Ⅱ?qū)HR血管平滑肌細(xì)胞

8、中ERK信號(hào)的影響。
　　 目的:
　　 探討血管緊張素Ⅱ(AngⅡ)對(duì)SHR和WKY大鼠血管平滑肌細(xì)胞(VSMCs)ERK信號(hào)途徑的影響。
　　 方法:
　　 1、體外培養(yǎng)SHR和WKY大鼠的VSMCs,先在培養(yǎng)基中加入終濃度為1×10-5mmol／L的纈沙坦或1×10-5mmol／L的PD98059或不加藥物,再給予1×10-7mmol／L的AngⅡ刺激24 h后收集細(xì)胞,以無血清培養(yǎng)基培養(yǎng)的VSMC

9、s作對(duì)照。
　　 2、SHR和WKY大鼠的VSMCs各分4組:1)對(duì)照組；2)AngⅡ刺激組；
　　 3)AngⅡ+纈沙坦組；4)AngⅡ+PD98059組。
　　 3、VSMCs中ERK活性、t—ERK、p-ERK以及MKP-1蛋白水平和MKP-1mRNA的含量測定方法同第一部分。
　　 4、用RT-PCR法測定VSMCs中MKP-1 mRNA水平。
　　 結(jié)果:
　　 1、SHR和WK

10、Y大鼠AngⅡ刺激組VSMCs中ERK活性、p-ERK、MKP-1及MKP-1 mRNA水平均明顯高于對(duì)照組(P<0.05)；SHR和WKY大鼠AngⅡ+纈沙坦組和AngⅡ+PD98059組的上述指標(biāo)與對(duì)照組比較均無顯著性差異。
　　 2、SHR大鼠VSMCs中ERK活性、p-ERK、MKP-1及MKP-1 mRNA均顯著高于相同干預(yù)的WKY大鼠(P<0.01)。
　　 3、SHR和WKY大鼠之間以及對(duì)照組、AngⅡ刺激