錯(cuò)配修復(fù)基因在兩個(gè)Lynch綜合征家系的突變研究.pdf

1、背景:錯(cuò)配修復(fù)(mismatch repair，MMR)是人體細(xì)胞中存在的一種糾正DNA復(fù)制過程中錯(cuò)配堿基的機(jī)制。MMR基因除了檢驗(yàn)和校正復(fù)制期間發(fā)生在微衛(wèi)星重復(fù)DNA序列小的插入和丟失之外，還能防止解旋的DNA序列重新結(jié)合。MMR基因突變破壞了MMR蛋白的功能，引起重復(fù)DNA序列的產(chǎn)生及DNA修復(fù)錯(cuò)誤，從而導(dǎo)致患者DNA出現(xiàn)微衛(wèi)星不穩(wěn)定(microsatellites instability，MSI)。MSI導(dǎo)致癌基因的激活或抑癌基因

2、的失活、癌基因突變的累積，從而誘發(fā)癌變。
　　 Lynch綜合征以患者易患結(jié)直腸癌、子宮內(nèi)膜癌和其他惡性腫瘤為典型癥狀，是由于錯(cuò)配修復(fù)基因突變引起的常染色體顯性遺傳病。該綜合征主要臨床特征是患者發(fā)病年齡較早，易患結(jié)直腸腫瘤，發(fā)生其他腫瘤的危險(xiǎn)性有所增加，包括子宮內(nèi)膜癌、胃癌、卵巢癌、尿道腫瘤、肝膽腫瘤、胰腺癌和小腸癌。這主要是因?yàn)長(zhǎng)ynch綜合征患者M(jìn)MR功能喪失后基因突變率升高，完成突變積累的時(shí)間縮短，因此由腺瘤發(fā)展至腺癌所需

3、時(shí)間縮短。人類正常人由腺瘤發(fā)展至腺癌需時(shí)8-10年，而Lynch綜合征患者僅需2-3年左右。
　　 作為遺傳特征最為突出的一種腸道惡性腫瘤，Lynch綜合征約占所有結(jié)直腸癌的2％～5％，所以Lynch曾把這種綜合征命名為遺傳性非息肉性結(jié)直腸癌(hereditary nonpolyposis colorectal cancer,HNPCC)。
　　 除了結(jié)直腸癌外，Lynch綜合征常常還伴有各種腸外器官的惡性腫瘤，其中最為

4、常見的腸道外惡性腫瘤是子宮內(nèi)膜癌。子宮內(nèi)膜癌是女性生殖道常見的惡性腫瘤之一，指原發(fā)于子宮內(nèi)膜的一組上皮性惡性腫瘤，嚴(yán)重危害女性健康。大約20％～30％的Lynch綜合征女性患者表現(xiàn)為子宮內(nèi)膜癌。Lynch綜合征家族攜帶MMR突變基因的女性終生患子宮內(nèi)膜癌的風(fēng)險(xiǎn)為60％，而普通人群僅為2.3％。目前，子宮內(nèi)膜癌真正的發(fā)病原因尚不十分清楚，其中約20％子宮內(nèi)膜癌患者有家族史，顯示出微衛(wèi)星不穩(wěn)定，說明與錯(cuò)配修復(fù)基因的突變有關(guān)。
　　

5、已經(jīng)證實(shí)的Lynch綜合征致病錯(cuò)配修復(fù)基因有:MSH2、MSH3、MSH6、MLH1、MLH3等。在已檢測(cè)到的錯(cuò)配修復(fù)基因突變中，MLH1基因突變占50％，MSH2基因突變占39％，MSH6基因突變占7％。
　　 目的:對(duì)一個(gè)結(jié)直腸癌家系和一個(gè)子宮內(nèi)膜癌家系進(jìn)行研究，分別確定這兩個(gè)家系的致病基因，為患者及其家庭提供準(zhǔn)確的遺傳咨詢，為臨床上結(jié)直腸癌、子宮內(nèi)膜癌等Lynch綜合征患者基因診斷提供指導(dǎo)，實(shí)現(xiàn)對(duì)攜帶者進(jìn)行早期診斷、早期干

6、預(yù)。
　　 方法:使用酚氯仿法抽提一個(gè)湖南洞口結(jié)直腸癌家系和一個(gè)湖南桂陽子宮內(nèi)膜癌家系成員的外周血DNA，然后采用PCR反應(yīng)結(jié)合Sanger測(cè)序法，分別對(duì)結(jié)直腸癌和子宮內(nèi)膜癌家系的患者進(jìn)行MLH1、MSH2和MSH6基因的突變檢測(cè);發(fā)現(xiàn)變異后，采用直接測(cè)序法鑒定此變異是否屬于突變。
　　 結(jié)果:在結(jié)直腸癌家系的患者中發(fā)現(xiàn)了位于MLH1基因第12號(hào)外顯子的雜合插入突變c.1344insG，該突變導(dǎo)致編碼蛋白提前終止，產(chǎn)生的

7、截短蛋白只含有477個(gè)氨基酸，丟失了具有二聚作用的功能域使得錯(cuò)配修復(fù)機(jī)制不能正常啟動(dòng)。
　　 在子宮內(nèi)膜癌家系的患者中發(fā)現(xiàn)了位于MSH6基因第4號(hào)外顯子的雜合缺失突變c.2297delA，該突變同樣導(dǎo)致編碼蛋白的提前終止，產(chǎn)生的截短蛋白總共只有773個(gè)氨基酸，喪失了ATP結(jié)合位點(diǎn)，MSH2結(jié)合位點(diǎn)等重要功能域，使得錯(cuò)配修復(fù)功能紊亂。
　　 通過正常對(duì)照實(shí)驗(yàn)表明，c.2297delA和c.1344insG突變只存在于本研究