錯配修復基因在兩個Lynch綜合征家系的突變研究.pdf

1、背景:錯配修復(mismatch repair，MMR)是人體細胞中存在的一種糾正DNA復制過程中錯配堿基的機制。MMR基因除了檢驗和校正復制期間發(fā)生在微衛(wèi)星重復DNA序列小的插入和丟失之外，還能防止解旋的DNA序列重新結合。MMR基因突變破壞了MMR蛋白的功能，引起重復DNA序列的產(chǎn)生及DNA修復錯誤，從而導致患者DNA出現(xiàn)微衛(wèi)星不穩(wěn)定(microsatellites instability，MSI)。MSI導致癌基因的激活或抑癌基因

2、的失活、癌基因突變的累積，從而誘發(fā)癌變。
　　 Lynch綜合征以患者易患結直腸癌、子宮內(nèi)膜癌和其他惡性腫瘤為典型癥狀，是由于錯配修復基因突變引起的常染色體顯性遺傳病。該綜合征主要臨床特征是患者發(fā)病年齡較早，易患結直腸腫瘤，發(fā)生其他腫瘤的危險性有所增加，包括子宮內(nèi)膜癌、胃癌、卵巢癌、尿道腫瘤、肝膽腫瘤、胰腺癌和小腸癌。這主要是因為Lynch綜合征患者MMR功能喪失后基因突變率升高，完成突變積累的時間縮短，因此由腺瘤發(fā)展至腺癌所需

3、時間縮短。人類正常人由腺瘤發(fā)展至腺癌需時8-10年，而Lynch綜合征患者僅需2-3年左右。
　　 作為遺傳特征最為突出的一種腸道惡性腫瘤，Lynch綜合征約占所有結直腸癌的2％～5％，所以Lynch曾把這種綜合征命名為遺傳性非息肉性結直腸癌(hereditary nonpolyposis colorectal cancer,HNPCC)。
　　 除了結直腸癌外，Lynch綜合征常常還伴有各種腸外器官的惡性腫瘤，其中最為

4、常見的腸道外惡性腫瘤是子宮內(nèi)膜癌。子宮內(nèi)膜癌是女性生殖道常見的惡性腫瘤之一，指原發(fā)于子宮內(nèi)膜的一組上皮性惡性腫瘤，嚴重危害女性健康。大約20％～30％的Lynch綜合征女性患者表現(xiàn)為子宮內(nèi)膜癌。Lynch綜合征家族攜帶MMR突變基因的女性終生患子宮內(nèi)膜癌的風險為60％，而普通人群僅為2.3％。目前，子宮內(nèi)膜癌真正的發(fā)病原因尚不十分清楚，其中約20％子宮內(nèi)膜癌患者有家族史，顯示出微衛(wèi)星不穩(wěn)定，說明與錯配修復基因的突變有關。
　　

5、已經(jīng)證實的Lynch綜合征致病錯配修復基因有:MSH2、MSH3、MSH6、MLH1、MLH3等。在已檢測到的錯配修復基因突變中，MLH1基因突變占50％，MSH2基因突變占39％，MSH6基因突變占7％。
　　 目的:對一個結直腸癌家系和一個子宮內(nèi)膜癌家系進行研究，分別確定這兩個家系的致病基因，為患者及其家庭提供準確的遺傳咨詢，為臨床上結直腸癌、子宮內(nèi)膜癌等Lynch綜合征患者基因診斷提供指導，實現(xiàn)對攜帶者進行早期診斷、早期干

6、預。
　　 方法:使用酚氯仿法抽提一個湖南洞口結直腸癌家系和一個湖南桂陽子宮內(nèi)膜癌家系成員的外周血DNA，然后采用PCR反應結合Sanger測序法，分別對結直腸癌和子宮內(nèi)膜癌家系的患者進行MLH1、MSH2和MSH6基因的突變檢測;發(fā)現(xiàn)變異后，采用直接測序法鑒定此變異是否屬于突變。
　　 結果:在結直腸癌家系的患者中發(fā)現(xiàn)了位于MLH1基因第12號外顯子的雜合插入突變c.1344insG，該突變導致編碼蛋白提前終止，產(chǎn)生的

7、截短蛋白只含有477個氨基酸，丟失了具有二聚作用的功能域使得錯配修復機制不能正常啟動。
　　 在子宮內(nèi)膜癌家系的患者中發(fā)現(xiàn)了位于MSH6基因第4號外顯子的雜合缺失突變c.2297delA，該突變同樣導致編碼蛋白的提前終止，產(chǎn)生的截短蛋白總共只有773個氨基酸，喪失了ATP結合位點，MSH2結合位點等重要功能域，使得錯配修復功能紊亂。
　　 通過正常對照實驗表明，c.2297delA和c.1344insG突變只存在于本研究