膽堿能抗炎通路對大鼠缺血再灌注心肌基因表達(dá)的影響.pdf

1、目的：研究膽堿能抗炎通路對大鼠缺血再灌注心肌基因表達(dá)的影響，并探討其可能的分子機(jī)制。 方法： （1）選擇20只SD雄性大鼠隨機(jī)分成2組，缺血再灌注組（I/R組）和迷走神經(jīng)電刺激組（STM組），每組10只。分離頸部左側(cè)迷走神經(jīng)，暴露胸腔，在動脈圓錐與左心耳根部間結(jié)扎冠狀動脈左前降支（left anterior descending coronary artery，LAD），結(jié)扎30min后，松開縫線使冠狀動脈再通120mi

2、n。STM組在缺血再灌注前10min開始以5V、2ms、1HZ強度持續(xù)電刺激頸部左側(cè)迷走神經(jīng)20min。 （2）缺血前由尾靜脈及再灌注120min后由右心房各取0.5ml血測血漿肌鈣蛋白Ⅰ（Cardiac Troponin I，cTn-I）。再灌注120min后將每組隨機(jī)分為2部份，一部份（n=7）取左心室心肌組織采用Evan’s Blue和TTC雙染色法測定心肌梗死面積；一部分（n=3）取左心室缺血區(qū)心肌組織成功提取RNA后，

3、與Affymetrix大鼠U2302.0芯片雜交，獲得I/R組與STM組心肌基因表達(dá)譜。 （3）運用GeneSpring軟件篩選出兩組間差異表達(dá)顯著的基因，對其進(jìn)行層級聚類分析，基因本體分析（Gene ontology，GO）及信號傳導(dǎo)通路（Pathway）分析。根據(jù)分析結(jié)果及相關(guān)文獻(xiàn)查閱，探討膽堿能抗炎通路對缺血再灌注心肌基因表達(dá)影響可能的分子機(jī)制，并對其中5個具有代表意義的基因（Bdkrb2，Ntrk1，Cd401g，ATP

4、2a2，Ctnnb1）進(jìn)行實時定量逆轉(zhuǎn)錄多聚酶鏈反應(yīng)（Real-Time PCR）驗證。 結(jié)果： （1）cTn-I表達(dá)兩組缺血前無差異（I/R組：4.52±0.56 ng/ml，STM組：4.50±0.57ng/ml，p>0.05）：STM組在再灌注120min時點（32.33±6.25 ng/ml）明顯小于I/R組（64.35±5.89ng/ml）（P<0.05）。 （2）各組間心肌缺血區(qū)范圍無明顯差異（I/R

5、組：48.2±4.5％，STM組：47.5±4.6％，p>0.05）。STM組心肌梗死區(qū)面積（25.5±3.9％）較I/R組（45.5±4.8％）明顯縮?。≒<0.05）。 （3）基因表達(dá)譜篩選得到186個差異表達(dá)顯著的基因或探針，其中上調(diào)基因或探針為133個，下調(diào)基因或探針為53個。GO分析顯示主要影響了3類基因的改變：第一類主要涉及膜表面受體，代表基因為：Bdkrb2，Ntrk1，Cd401g；第二類主要為ATP酶，ATP結(jié)

6、合蛋白以及Ca離子以及其他離子轉(zhuǎn)運蛋白，代表基因為：ATP2a2；第三類主要為轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子，代表基因為Ctnnb1。其中上調(diào)基因：Bdkrb2，ATP2a2，Ntrk1，Ctnnb1文獻(xiàn)報道與心肌保護(hù)有關(guān)；下調(diào)基因Cd401g與炎癥有關(guān)。Pathway分析顯示差異基因參與30條信號通路，包括Wnt通路。 （4）Real-time PCR結(jié)果和基因芯片表達(dá)的結(jié)果相符。STM組中，Bdkrb2，ATP2a2，Ntrk1，Ctnnb1

7、均上調(diào)，Cd401g下調(diào)。 結(jié)論： 膽堿能抗炎通路對缺血再灌注心肌具有保護(hù)作用，其心肌基因表達(dá)譜發(fā)生了很大的變化，主要涉及膜表面受體，ATP酶、ATP結(jié)合蛋白以及Ca離子以及其他離子轉(zhuǎn)運蛋白，轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子等。提示膽堿能抗炎通路可能在抗炎的同時能通過興奮心肌M2受體使緩激肽受體B2（Bdkrb2）表達(dá)上調(diào)，神經(jīng)生長因子受體（Ntrk1）表達(dá)上調(diào)，Cd401g表達(dá)下調(diào)，肌漿網(wǎng)Ca2+泵（ATP2a2）表達(dá)上調(diào)，Wrt/β-c