EGCG抑制涎腺腺樣囊性癌細(xì)胞生長(zhǎng)及EGFR-Erk信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的作用研究.pdf

1、研究背景與目的:
　　腺樣囊性癌(adenoid cystic carcinoma，ACC)是涎腺中最為常見(jiàn)的惡性腫瘤之一，其生長(zhǎng)較為緩慢但侵襲性強(qiáng)，常沿神經(jīng)、血管生長(zhǎng)，易復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移。目前對(duì)該腫瘤的治療主要以手術(shù)和放化療為主，尚達(dá)不到理想的治療效果，預(yù)后極差。且常規(guī)的化學(xué)藥物所產(chǎn)生的毒副作用以及腫瘤細(xì)胞對(duì)化療藥物容易產(chǎn)生耐藥性仍是困擾臨床的難題。因此，尋找或研發(fā)能夠抑制腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)的無(wú)毒藥物成為當(dāng)前口腔醫(yī)學(xué)領(lǐng)域的研究熱點(diǎn)。

2、　　茶多酚(tea polyphenols)具有良好的抗瘤活性，但其作用機(jī)制仍不明確。茶多酚是茶葉中多酚類物質(zhì)的總稱，其中EGCG（表沒(méi)食子兒茶素沒(méi)食子酸酯）含量最高。茶多酚中EGCG能抑制口腔癌、肺癌、胃癌、大腸癌等癌細(xì)胞生長(zhǎng)，現(xiàn)已發(fā)現(xiàn)其通過(guò)多種途徑抑制腫瘤的形成、生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移。EGCG對(duì)于不同種類腫瘤細(xì)胞的抑制作用及其相關(guān)機(jī)制并不一致，其對(duì)于涎腺腺樣囊性癌的抑制作用及相關(guān)機(jī)制未見(jiàn)報(bào)道。本文擬研究EGCG對(duì)涎腺腺樣囊性癌SACC-83細(xì)

3、胞株增殖、凋亡的作用，并對(duì)EGCG影響細(xì)胞生長(zhǎng)的機(jī)制進(jìn)行初步探討，為進(jìn)一步臨床EGCG靶向治療口腔腺癌的應(yīng)用提供細(xì)胞學(xué)參考。
　　研究方法:
　　本研究以涎腺腺樣囊性癌SACC-83細(xì)胞株實(shí)驗(yàn)對(duì)象，研究不同濃度（0-80μM）的EGCG對(duì)SACC-83細(xì)胞生長(zhǎng)的作用及其機(jī)制。通過(guò)倒置顯微鏡下細(xì)胞形態(tài)觀察，MTS法檢測(cè)細(xì)胞增殖活力，流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞凋亡，Western Blot蛋白印跡法檢測(cè)EGCG對(duì)SACC-83細(xì)胞EGF

4、R/Erk信號(hào)通路蛋白以及抗凋亡蛋白Bcl-2的表達(dá)情況，研究EGCG對(duì)SACC-83細(xì)胞生長(zhǎng)的影響，并對(duì)EGCG影響細(xì)胞生長(zhǎng)的機(jī)制進(jìn)行初步探討。
　　研究結(jié)果:
　　1.倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞學(xué)形態(tài)發(fā)現(xiàn)，EGCG（濃度0-80μM）對(duì)涎腺腺樣囊性癌細(xì)胞SACC-83作用48 h時(shí)，SACC-83細(xì)胞隨EGCG濃度升高而逐步出現(xiàn)細(xì)胞凋亡現(xiàn)象。細(xì)胞體積縮小，連接消失，與周圍的細(xì)胞脫離，懸浮細(xì)胞增多，細(xì)胞質(zhì)呈明顯的空泡化。

5、　　2.經(jīng)MTS檢測(cè)，EGCG（0-80μM）對(duì)SACC-83有增殖抑制作用。當(dāng)濃度達(dá)到40μM時(shí)，EGCG作用48、72 h后細(xì)胞的增殖率低于對(duì)照組（P＜0.05）。當(dāng)達(dá)到80μM時(shí)，24、48、72 h后均檢測(cè)到了細(xì)胞增殖率與對(duì)照組有顯著性差異(P＜0.05)。且48、72 h后，80μM組的細(xì)胞增殖率顯著低于40μM組，40μM組顯著低于20μM組(P＜0.05)。EGCG在濃度40-80μM的范圍內(nèi)對(duì)SACC-83細(xì)胞具有生長(zhǎng)抑

6、制作用，并存在劑量效應(yīng)。
　　3.經(jīng)流式細(xì)胞儀分析，EGCG(0-80μM)作用于SACC-83細(xì)胞24、48、72 h后，與空白對(duì)照組比較，濃度20μM、40μM、80μM組凋亡率顯著增高，且三個(gè)時(shí)間點(diǎn)的20μM組的凋亡率顯著高于10μM組(P＜0.05)。在這三個(gè)時(shí)間點(diǎn)均未檢測(cè)到20μM、40μM、80μM組之間凋亡率的差異(P＞0.05)。EGCG在濃度20-80μM時(shí)對(duì)SACC-83細(xì)胞具有凋亡促進(jìn)作用。
　　4.W

7、estern blot蛋白印跡法檢測(cè)EGCG(0-80μM)作用SACC-83細(xì)胞48 h后，隨著EGCG濃度的增大，EGFR（表皮生長(zhǎng)因子受體）、p-Erk（磷酸化細(xì)胞外信號(hào)調(diào)節(jié)激酶1/2）、Bcl-2（B淋巴細(xì)胞瘤-2）蛋白的表達(dá)降低，Erk（細(xì)胞外信號(hào)調(diào)節(jié)激酶1/2）的相對(duì)表達(dá)量基本持平。EGCG對(duì)SACC-83細(xì)胞有抑制Bcl-2、EGFR蛋白表達(dá)、Erk蛋白磷酸化的作用。
　　結(jié)論:
　　1.EGCG對(duì)涎腺腺樣囊性