殼聚糖納米粒介導(dǎo)hTERT-siRNA干擾惡性膠質(zhì)瘤U251細(xì)胞的實驗研究.pdf

1、南方醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文殼聚糖納米粒介導(dǎo)hTERTsiRNA干擾惡性膠質(zhì)瘤U251細(xì)胞的實驗研究姓名：姚鵬飛申請學(xué)位級別：碩士專業(yè)：神經(jīng)外科學(xué)指導(dǎo)教師：柯以銓20080420中文摘要新手段。RNAi是雙鏈RNA(double—strandedRNA，dsRNA)降解特異性靶基因轉(zhuǎn)錄出的mRNA、從而抑制靶蛋白表達(dá)的現(xiàn)象。根據(jù)堿基配對原則以mRNA為靶點能高度特異地阻斷蛋白質(zhì)的表達(dá)，從而達(dá)到從根本上治療疾病的目的。自從20世紀(jì)九十年代發(fā)現(xiàn)

2、RNAi這一現(xiàn)象以來，RNAi已被廣泛應(yīng)用于研究基因功能、信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路和基因治療等方面。然而，發(fā)揮RNAi作用的2123nt的小干擾RNA(smallinterferingRNA，siRNA)分子容易被核酸酶降解；而且真核細(xì)胞不易攝取外源性裸露核酸，siRNA轉(zhuǎn)染細(xì)胞效率低下，必須選擇適當(dāng)?shù)妮d體包裹siRNA，以免降解并且能夠輔助siRNA轉(zhuǎn)染細(xì)胞。目前siRNA轉(zhuǎn)運體仍局限于病毒、脂質(zhì)體、DNA質(zhì)粒等，這些載體容易引起毒副作用及免疫反

3、應(yīng)，均不是最佳的基因載體。對于腦膠質(zhì)瘤來說，還存在血腦屏障，使siRNA難以進(jìn)入腫瘤細(xì)胞。因此，必須尋找合適的載體系統(tǒng)，才能將RNAi從有效地研究工具轉(zhuǎn)化為可行的治療策略。鑒于殼聚糖所具有的良好生物相容性、生物降解性和抗腫瘤活性，我們選擇人端粒酶反轉(zhuǎn)錄酶(humantelomerasereversetranscriptase，hTERT)作為RNAi治療靶位點，通過納米技術(shù)制備殼聚糖納米粒，包裹siRNA，使其能有效保護siRNA，并能

4、控制siRNA緩慢釋放，并能有效地轉(zhuǎn)染U251細(xì)胞，抑制其增殖及生長，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞凋亡，達(dá)到治療腫瘤的目的。有望為腫瘤RNAi治療提供一種新的探索。第一部分：殼聚糖siRNA納米粒的制備及其特性目的：探討離子凝膠法制備殼聚糖(chitosan)siRNA納米粒的特點，并分析其理化性質(zhì)。方法：將殼聚糖、三聚磷酸鈉(pentasodiumtripolyphosphate，TPP)和針對hTERT基因的siRNA通過離子凝膠法制備殼聚糖siR