西地那非同系物逆轉(zhuǎn)MCF-7-ADR腫瘤細(xì)胞耐藥性的機(jī)制研究.pdf

1、腫瘤多藥耐藥(multidrug resistance,MDR)是腫瘤化療失敗和患者死亡的一個(gè)主要原因，一系列具有良好逆轉(zhuǎn)腫瘤細(xì)胞多藥耐藥活性的化合物已被報(bào)道，但是這些化合物都對(duì)人體有毒副作用且有很多尚未經(jīng)過(guò)臨床實(shí)驗(yàn)，因此研發(fā)無(wú)毒的MDR逆轉(zhuǎn)劑是治愈腫瘤的一項(xiàng)探索性研究。本研究工作的重點(diǎn)是探討8種西地那非同系物對(duì)人乳腺癌MCF-7/ADR細(xì)胞耐藥性的逆轉(zhuǎn)作用。首先主要采用MTT法檢測(cè)8種西地那非同系物對(duì)人乳腺癌MCF-7/ADR細(xì)胞耐藥

2、性的逆轉(zhuǎn)作用；然后運(yùn)用流式細(xì)胞術(shù)(FCM)觀察篩選出來(lái)有逆轉(zhuǎn)活性的兩種西地那非同系物（自編號(hào)XDNF1-0425和XDNF8-0113）對(duì)MCF-7/ADR細(xì)胞P-gp蛋白外排功能的影響；Western blot實(shí)驗(yàn)檢測(cè)該兩種西地那非同系物對(duì)MCF-7/ADR細(xì)胞P-gp蛋白表達(dá)的影響；最后用GENMED磷酸二酯酶5（PDE5）活性測(cè)定試劑盒檢測(cè)該兩種同系物對(duì)5型磷酸二酯酶的抑制作用；所有實(shí)驗(yàn)都以西地那非作為陽(yáng)性對(duì)照組，因?yàn)橐延醒芯孔C明

3、體西地那非外實(shí)驗(yàn)?zāi)茌^好的逆轉(zhuǎn)P-gp蛋白介導(dǎo)的MDR。
　　本課題的主要研究結(jié)果包括以下幾個(gè)方面：
　　1）采用MTT法檢測(cè)8種西地那非同系物逆轉(zhuǎn)人乳腺癌MCF-7/ADR細(xì)胞株對(duì)阿霉素耐藥的作用，以西地那非單體為陽(yáng)性對(duì)照，共篩選出兩種逆轉(zhuǎn)效果與西地那非相近的兩種西地那非同系物：XDNF1-0425和XDNF8-0113。
　　2）MTT法測(cè)定篩選出來(lái)的兩種西地那非同系物（XDNF1-0425和XDNF8-0113）體

4、外實(shí)驗(yàn)的安全濃度,實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示兩種西地那非同系物對(duì)MCF-7/ADR細(xì)胞株的IC50均>100μmol/L，在20μmol/L時(shí)細(xì)胞存活率均>90％；同時(shí)測(cè)定兩種西地那非同系物對(duì)MCF-7/ADR耐藥的逆轉(zhuǎn)作用，實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示5μmol/L的兩種西地那非同系物對(duì)MCF-7/ADR細(xì)胞耐藥性的逆轉(zhuǎn)倍數(shù)分別是2.26和2.09，20μmol/L的兩種西地那非同系物對(duì)MCF-7/ADR細(xì)胞耐藥性的逆轉(zhuǎn)倍數(shù)分別是11.83和13.47。
　

5、　3）細(xì)胞分子學(xué)方法研究?jī)煞N西地那非同系物（XDNF1-0425和XDNF8-0113）逆轉(zhuǎn)腫瘤細(xì)胞耐藥性的機(jī)制：其中流式細(xì)胞術(shù)結(jié)果顯示經(jīng)10μmol/L和20μmol/L的西地那非同系物處理后的MCF-7/ADR細(xì)胞內(nèi)Rhodaminel23濃度明顯增強(qiáng)，Western blot實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示兩種同系物作用MCF-7/ADR細(xì)胞后對(duì)其P-gp蛋白的表達(dá)沒(méi)有明顯影響。
　　4）GENMED磷酸二酯酶5（PDE5）活性酶測(cè)定試劑盒檢測(cè)