西地那非同系物逆轉MCF-7-ADR腫瘤細胞耐藥性的機制研究.pdf

1、腫瘤多藥耐藥(multidrug resistance,MDR)是腫瘤化療失敗和患者死亡的一個主要原因，一系列具有良好逆轉腫瘤細胞多藥耐藥活性的化合物已被報道，但是這些化合物都對人體有毒副作用且有很多尚未經過臨床實驗，因此研發(fā)無毒的MDR逆轉劑是治愈腫瘤的一項探索性研究。本研究工作的重點是探討8種西地那非同系物對人乳腺癌MCF-7/ADR細胞耐藥性的逆轉作用。首先主要采用MTT法檢測8種西地那非同系物對人乳腺癌MCF-7/ADR細胞耐藥

2、性的逆轉作用；然后運用流式細胞術(FCM)觀察篩選出來有逆轉活性的兩種西地那非同系物（自編號XDNF1-0425和XDNF8-0113）對MCF-7/ADR細胞P-gp蛋白外排功能的影響；Western blot實驗檢測該兩種西地那非同系物對MCF-7/ADR細胞P-gp蛋白表達的影響；最后用GENMED磷酸二酯酶5（PDE5）活性測定試劑盒檢測該兩種同系物對5型磷酸二酯酶的抑制作用；所有實驗都以西地那非作為陽性對照組，因為已有研究證明

3、體西地那非外實驗能較好的逆轉P-gp蛋白介導的MDR。
　　本課題的主要研究結果包括以下幾個方面：
　　1）采用MTT法檢測8種西地那非同系物逆轉人乳腺癌MCF-7/ADR細胞株對阿霉素耐藥的作用，以西地那非單體為陽性對照，共篩選出兩種逆轉效果與西地那非相近的兩種西地那非同系物：XDNF1-0425和XDNF8-0113。
　　2）MTT法測定篩選出來的兩種西地那非同系物（XDNF1-0425和XDNF8-0113）體

4、外實驗的安全濃度,實驗結果顯示兩種西地那非同系物對MCF-7/ADR細胞株的IC50均>100μmol/L，在20μmol/L時細胞存活率均>90％；同時測定兩種西地那非同系物對MCF-7/ADR耐藥的逆轉作用，實驗結果顯示5μmol/L的兩種西地那非同系物對MCF-7/ADR細胞耐藥性的逆轉倍數(shù)分別是2.26和2.09，20μmol/L的兩種西地那非同系物對MCF-7/ADR細胞耐藥性的逆轉倍數(shù)分別是11.83和13.47。
　

5、　3）細胞分子學方法研究兩種西地那非同系物（XDNF1-0425和XDNF8-0113）逆轉腫瘤細胞耐藥性的機制：其中流式細胞術結果顯示經10μmol/L和20μmol/L的西地那非同系物處理后的MCF-7/ADR細胞內Rhodaminel23濃度明顯增強，Western blot實驗結果顯示兩種同系物作用MCF-7/ADR細胞后對其P-gp蛋白的表達沒有明顯影響。
　　4）GENMED磷酸二酯酶5（PDE5）活性酶測定試劑盒檢測