WDR26在系統(tǒng)性硬化癥皮膚成纖維細(xì)胞中的表達(dá)及作用的初步研究.pdf

1、目的:研究WDR26在系統(tǒng)性硬化癥(systemic sclerosis，SSc)患者及正常人皮膚成纖維細(xì)胞中的表達(dá)，以及WDR26在轉(zhuǎn)化生長因子-β(transforming growth factor-β，TGF-β)刺激的皮膚成纖維細(xì)胞中的表達(dá)及作用。
　　 方法:①采用Western-blot檢測SSc患者及正常人皮膚成纖維細(xì)胞中WDR26蛋白的表達(dá)差異。②以不同濃度TGF-β(0，0.1，1.0，5.0，10.0ng/

2、ml)刺激SSc患者和正常人皮膚成纖維細(xì)胞或同一濃度TGF-β(10ng/ml)刺激成纖維細(xì)胞不同時(shí)間（0，6，12，24，48小時(shí)）后，用Real-time PCR檢測成纖維細(xì)胞中WDR26 mRNA的表達(dá)變化，研究TGF-β對成纖維細(xì)胞中WDR26表達(dá)的影響。③在正常人成纖維細(xì)胞中過表達(dá)或低表達(dá)WDR26，分別用TGF-β(10ng/ml)刺激，Real-time PCR檢測:a.成纖維細(xì)胞中細(xì)胞外基質(zhì)I型膠原α1(COL1A1)、

3、纖連蛋白(FN) mRNA的表達(dá)，研究WDR26對TGF-β誘導(dǎo)的成纖維細(xì)胞中細(xì)胞外基質(zhì)生成的影響;b.成纖維細(xì)胞中TGF-β信號通路蛋白SMAD3 mRNA的表達(dá)，對WDR26在成纖維細(xì)胞TGF-β通路中的作用機(jī)制進(jìn)行初步探索。
　　 結(jié)果:①SSc患者皮膚成纖維細(xì)胞中WDR26蛋白表達(dá)較正常人增多。②TGF-β(10ng/ml)刺激48小時(shí)后，正常人成纖維細(xì)胞表達(dá)WDR26蛋白明顯增高。采用不同濃度TGF-β刺激成纖維細(xì)胞或

4、同一濃度TGF-β刺激成纖維細(xì)胞不同時(shí)間后，隨著刺激濃度的增加和刺激時(shí)間的延長，SSc和正常人的成纖維細(xì)胞中WDR26 mRNA的表達(dá)均呈先增高后降低的趨勢;正常人成纖維細(xì)胞較SSc患者表達(dá)WDR26 mRNA多，且變化的速度更快，兩者的表達(dá)在48小時(shí)趨于接近。⑧通過在成纖維細(xì)胞中過表達(dá)或低表達(dá)WDR26，我們發(fā)現(xiàn)過表達(dá)WDR26可抑制TGF-β誘導(dǎo)的成纖維細(xì)胞中COL1A1 mRNA的表達(dá)，而低表達(dá)WDR26可促進(jìn)TGF-β誘導(dǎo)的成纖

5、維細(xì)胞中COL1A1mRNA的表達(dá);低表達(dá)WDR26時(shí)，成纖維細(xì)胞中SMAD3 mRNA表達(dá)降低，過表達(dá)WDR26時(shí)，成纖維細(xì)胞中SMAD3 mRNA的表達(dá)也降低，SMAD3 mRNA的表達(dá)隨著WDR26表達(dá)水平的增高呈先增高后降低的趨勢。
　　 結(jié)論:
　　 ①SSc患者皮膚成纖維細(xì)胞中WDR26表達(dá)較正常人增多。
　　 ②TGF-β可誘導(dǎo)皮膚成纖維細(xì)胞中WDR26表達(dá)。
　　 ③WDR26能抑制TGF