ERα86在中樞神經(jīng)系統(tǒng)中表達(dá)的意義及對(duì)PC12細(xì)胞凋亡和分化的影響.pdf

1、眾所周知,雌激素對(duì)中樞神經(jīng)系統(tǒng)具有保護(hù)作用,其作用方式主要通過(guò)與胞內(nèi)雌激素受體(ER)結(jié)合,調(diào)節(jié)基因的轉(zhuǎn)錄。經(jīng)典的雌激素受體主要有ERα和ERβ兩類(lèi)。前者包含三個(gè)成員,分別是ERα66,ERα46和ERα36。ERα66主要位于細(xì)胞核內(nèi),但ER36主要位于胞漿和胞膜上。新近研究發(fā)現(xiàn),ERα36能夠介導(dǎo)多種癌細(xì)胞膜起始的信號(hào)通路的激活,從而影響細(xì)胞的增殖。我們實(shí)驗(yàn)室前期的研究表明,大鼠腦內(nèi)有ERα36的表達(dá),但其作用還不清楚。
　　

2、 本文我們首先利用Western Blot和免疫細(xì)胞熒光的方法繼續(xù)檢測(cè)了ERα36在昆明種小鼠腦生后發(fā)育不同時(shí)期各部位的分布情況和在幾種神經(jīng)細(xì)胞的表達(dá)與定位。之后利用Hoechst33342染色、流式細(xì)胞儀及Western Blot的方法觀察了ERα36基因沉默(PC12-ERα36L1)對(duì)E2預(yù)保護(hù)后MPP+誘導(dǎo)PC12細(xì)胞的凋亡情況及對(duì)凋亡相關(guān)蛋白表達(dá)的影響。最后利用本實(shí)驗(yàn)室未分化PC12細(xì)胞(PC12-unD)為材料,研究ERα

3、36在PC12細(xì)胞分化過(guò)程中對(duì)分化相關(guān)蛋白表達(dá)的影響。旨在為進(jìn)一步了解ERα36在中樞神經(jīng)系統(tǒng)中的作用以及與神經(jīng)退行性疾病的關(guān)系奠定基礎(chǔ)。
　　 結(jié)果如下:
　　 (1)幾種神經(jīng)細(xì)胞和小鼠腦發(fā)育各個(gè)時(shí)期除間腦外均有ERα36的表達(dá),其中海馬、小腦、腦干內(nèi)的ERα36在生后發(fā)育的不同時(shí)期表達(dá)變化不明顯,但在皮層內(nèi)的表達(dá)較多,且隨年齡的增加而增加；ERα66和ERα46在海馬內(nèi)的表達(dá)模式基本相同(先增高后降低)；而在其它組織

4、中,幾種雌激素受體的表達(dá)有各自的特點(diǎn)。
　　 (2)E2預(yù)保護(hù)1h后,再加入MPP+作用48h,PC12和PC12-ERα36L1細(xì)胞均能抵抗Mpp+誘導(dǎo)的凋亡,且PC12-ERα36L1細(xì)胞凋亡情況明顯低于PC1細(xì)胞。通過(guò)檢測(cè)凋亡相關(guān)信號(hào)蛋白顯示,與對(duì)照組相比,在PC12-ERα36L1細(xì)胞中,E2+MPP+組Caspase-3的表達(dá)明顯降低。
　　 (3)利用ERα36 shRNA轉(zhuǎn)染未分化的PC12細(xì)胞(PC12-