漢賽巴爾通體P17基因原核表達及間接ELISA檢測方法的建立.pdf

1、目的：為臨床上應用間接ELISA方法檢測漢賽巴爾通體病原體，本文通過對漢賽巴爾通體 P17基因原核誘導表達，用獲得的重組蛋白分析研究間接 ELISA檢測方法的最佳條件。
　　方法：根據(jù) Genebank上的基因序列，對漢賽巴爾通體特有P17（片段長度為525bp）進行PCR擴增，并克隆到pET-28a載體上。將重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化到大腸桿菌DH-5α中，用l mmol/LIPTG誘導P17蛋白表達，然后將Ni-NTA柱純化的目的蛋白作為抗

2、原建立漢賽巴爾通體的人臨床間接ELISA檢測方法。
　　結(jié)果：成功獲得了分子量為22.6KD、濃度為3.44mg/mL P17基因重組蛋白。建立了間接ELISA方法的最佳條件為：P17基因蛋白稀釋濃度為1.25μg/ml，包被37℃2小時，5％脫脂奶37℃封閉1h，待檢血清稀釋度為1:400，37℃孵育1h，HRP-羊抗人IgG濃度1:5000，37℃孵育1h，底物37℃避光顯色25min，陰陽臨界值為0.1238。利用已建立的E