柞蠶細(xì)胞色素P450基因CYP4G25序列的克隆與表達(dá)分析.pdf

1、細(xì)胞色素P450單加氧酶系(cytochrome P450 monooxygenases，P450s)為廣泛分布于生物有機(jī)體內(nèi)的重要酶系。細(xì)胞色素P450基因起源于35億年前的一個(gè)共同祖先，是最古老和最龐大的超基因家族之一。細(xì)胞色素P450參與許多重要的生命過(guò)程，對(duì)動(dòng)物、植物、真菌和細(xì)菌等的研究表明許多不同催化反應(yīng)都有細(xì)胞色素P450的參與。對(duì)于昆蟲(chóng)而言，細(xì)胞色素P450在昆蟲(chóng)的生命活動(dòng)中起著十分重要的作用：主要涉及生長(zhǎng)、發(fā)育、取食等過(guò)

2、程，其對(duì)異生物質(zhì)的代謝特性導(dǎo)致了昆蟲(chóng)對(duì)殺蟲(chóng)劑的抗藥性和對(duì)植物有毒物質(zhì)的耐受性，它還參與了昆蟲(chóng)體內(nèi)保幼激素、蛻皮激素和脂肪酸等內(nèi)源化合物的合成與代謝，具有重要的生物學(xué)和遺傳學(xué)意義。
　　 柞蠶是一種正在開(kāi)發(fā)的野生絹絲昆蟲(chóng)，屬于鱗翅目、大蠶蛾科、柞蠶屬的泌絲昆蟲(chóng)。除了作為紡織工業(yè)原料利用外，還有很高的藥用和食用等經(jīng)濟(jì)價(jià)值。利用分子生物學(xué)和生物信息學(xué)方法對(duì)柞蠶P450基因進(jìn)行研究，獲得的主要結(jié)果如下：
　　 1．CYP4G25

3、基因的克隆及序列分析：
　　 采用RT-PCR和RACE-PCR方法克隆獲得了1個(gè)P450新基因CYP4G25的全長(zhǎng)序列。CYP4G25全長(zhǎng)2112bp，GenBank登錄號(hào)為GU205081，包括由111個(gè)核苷酸組成的5’端非編碼區(qū)(5’UTR)、由1674個(gè)核苷酸組成的ORF(開(kāi)放閱讀框)編碼557個(gè)氨基酸，分子量大小為63.6KD和等電點(diǎn)為8.6，以及由326個(gè)核苷酸組成的3’端非編碼區(qū)(3’UTR)。通過(guò)生物在線網(wǎng)站Ex

4、pasy分析氨基酸序列：含有血紅素結(jié)合位點(diǎn)，螺旋I、螺旋K、螺旋C以及N 端含有由22個(gè)疏水氨基酸組成的跨膜錨定區(qū)域。構(gòu)建系統(tǒng)進(jìn)化樹(shù)分析得到柞蠶和天蠶親緣關(guān)系最近。
　　 2.CYP4G25基因的表達(dá)分析：
　　 提取柞蠶不同時(shí)期和不同組織的總RNA，以M-MLV反轉(zhuǎn)錄第一鏈cDNA，以柞蠶Actin基因做內(nèi)參，進(jìn)行了半定量RT-PCR。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，選取的組織基本都有表達(dá)，在脂肪體、表皮。中腸、血液、絲腺、觸角、精巢和