復(fù)方褐藻素軟膏抗實(shí)驗(yàn)性痤瘡及THP-1細(xì)胞炎癥機(jī)制的研究.pdf

1、目的:
　　通過家兔痤瘡模型，觀察復(fù)方褐藻素軟膏主要成分褐藻素對(duì)痤瘡炎癥反應(yīng)的干預(yù)效果，觀察復(fù)方主要成分褐藻素、丹參酮Ⅱ A、小檗堿、黃芩苷和復(fù)方對(duì)痤瘡丙酸桿菌、金黃色葡萄球菌的抑菌效果，同時(shí)通過Elisa、Western blot觀察痤瘡丙酸桿菌活菌誘導(dǎo)單核細(xì)胞系THP-1細(xì)胞炎癥因子的表達(dá)，初步探討復(fù)方各主要成分抗炎作用機(jī)制，從而闡明復(fù)方褐藻素軟膏及其主要成分在治療痤瘡，改善痤瘡炎癥反應(yīng)的作用機(jī)制，為進(jìn)一步進(jìn)行復(fù)方褐藻素軟膏開

2、發(fā)提供實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。
　　方法:
　　1.制備Kligman兔耳痤瘡模型，造模14d，驗(yàn)證造模成功后，隨機(jī)將實(shí)驗(yàn)組的9只雄性家兔隨機(jī)分為A組、B組、C組，每組3只，并編號(hào)。A組涂超純水，B組涂2％褐藻素試劑，C組涂4％褐藻素試劑，用無菌棉簽均勻涂布于每只家兔耳內(nèi)側(cè)面耳導(dǎo)管開口處約2 cm×2 cm范圍，每天1次，每次0.7 mL，并且用溫水擦拭前一次的涂藥部位，連續(xù)涂14d，末次涂12 h后，觀察并拍照，處死，取材，制作病理切片

3、，記錄數(shù)據(jù)，并整理分析。
　　2.復(fù)方褐藻素軟膏各主要成分的體外抑菌試驗(yàn)。選取了痤瘡發(fā)生、發(fā)展過程中最常見的痤瘡丙酸桿菌和金黃色葡萄球菌進(jìn)行體外抑菌試驗(yàn)，用瓊脂擴(kuò)散法，設(shè)置不同濃度的褐藻素、丹參酮組、小檗堿、黃芩苷和復(fù)方的受試藥物溶液，分別觀察不同濃度的抑菌效果，用十字交叉法測(cè)量抑菌圈，記錄數(shù)據(jù)。
　　3.復(fù)方褐藻素軟膏主要成分對(duì)痤瘡丙酸桿菌感染THP-1細(xì)胞激活炎癥因子信號(hào)通路的調(diào)控。通過Elisa、Western blo

4、t，觀察活菌P.acnes刺激人源性單核細(xì)胞系THP-1細(xì)胞12h后細(xì)胞因子IL-8、TLR2、P-NF-kB p65的表達(dá)水平，初步探討P.acnes活菌誘導(dǎo)THP-1細(xì)胞炎癥因子的表達(dá)，進(jìn)行復(fù)方主要成分丹參酮ⅡA、褐藻素防治痤瘡炎癥反應(yīng)的機(jī)制研究。
　　結(jié)果:
　　1.制備家兔痤瘡模型，在褐藻素低、高兩個(gè)劑量組分別給藥后，與對(duì)照組對(duì)比，給藥組均有緩解痤瘡癥狀的作用，試驗(yàn)提示褐藻素可以減少家兔痤瘡模型炎癥反應(yīng)，并具有一定的

5、劑量依賴性。
　　2.用瓊脂擴(kuò)散法，設(shè)置不同濃度的褐藻素、丹參酮Ⅱ A、小檗堿、黃芩苷和聯(lián)合組，分別觀察不同濃度的抑菌效果，用十字交叉法測(cè)量抑菌圈直徑，并拍照，記錄和分析試驗(yàn)結(jié)果，試驗(yàn)結(jié)果提示復(fù)方褐藻素軟膏各主要成分在不同濃度時(shí)，對(duì)痤瘡丙酸桿菌和金黃葡萄球菌均呈現(xiàn)不同程度的抑制作用。
　　3.通過Elisa、Western blot的實(shí)驗(yàn)方法推斷復(fù)方主要成分對(duì)痤瘡丙酸桿菌誘導(dǎo)THP-1細(xì)胞炎癥因子表達(dá)及其抗炎作用機(jī)制。痤瘡丙

6、酸桿菌刺激后，THP-1細(xì)胞的IL-8分泌量明顯升高;與單純的痤瘡丙酸桿菌誘導(dǎo)組對(duì)比，褐藻素、丹參酮ⅡA給藥明顯抑制了痤瘡丙酸桿菌誘導(dǎo)后THP-1細(xì)胞內(nèi)TLR2、P-NF-kB p65、IL-8的表達(dá)。
　　結(jié)論:
　　1.褐藻素的高、低劑量組可以改善家兔痤瘡模型角質(zhì)化，改善炎癥癥狀，表明復(fù)方褐藻素具有防治痤瘡和改善其炎癥反應(yīng)的作用。
　　2.在試驗(yàn)濃度內(nèi)，復(fù)方褐藻素軟膏及其主要成分褐藻素、丹參酮Ⅱ A、小檗堿和黃芩苷