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1、前蛋白轉(zhuǎn)化酶枯草桿菌蛋白酶9型(Proprotein convertase subtilisin/kexin type9,PCSK9)是機(jī)體內(nèi)調(diào)節(jié)低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)代謝的重要蛋白之一。目前研究發(fā)現(xiàn),PCSK9通過(guò)介導(dǎo)LDLR的降解,間接調(diào)節(jié)了血清中LDL-C的含量,并且抑制PCSK9能夠顯著地降低血清LDL-C的水平,所以PCSK9是近年來(lái)高膽固醇血癥及動(dòng)脈粥樣硬化的熱門治療靶點(diǎn)。本研究目的是構(gòu)建靶向PCSK9的重組疫苗,
2、為降膽固醇疫苗藥物的開(kāi)發(fā)提供實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。
本課題選取PCSK9關(guān)鍵候選表位(153-163和370-383)以及催化結(jié)構(gòu)域作為候選疫苗的關(guān)鍵元件。首次將PCSK9表位或結(jié)構(gòu)域移植到白喉毒素跨膜結(jié)構(gòu)域(DTT)的loop區(qū)或羧基末端,構(gòu)建成重組表位疫苗或結(jié)構(gòu)域疫苗。利用重疊PCR進(jìn)行原核載體構(gòu)建,并進(jìn)行原核表達(dá)及純化,制備得到了5個(gè)重組疫苗蛋白(PCSK9-1,PCSK9-2,PCSK9-3,PCSK9-6,PCSK9-7)。免疫
3、BALB/c小鼠后通過(guò)ELISA檢測(cè)血清抗體效價(jià),Western Blot方法檢測(cè)血清抗體與 mPCSK9及hPCSK9結(jié)合的特異性,酶偶聯(lián)比色法檢測(cè)各組小鼠膽固醇水平。結(jié)果顯示,在小鼠體內(nèi)疫苗PCSK9-1、PCSK9-6和PCSK9-7能夠激發(fā)免疫反應(yīng),產(chǎn)生針對(duì)hPCSK9和mPCSK9的特異性的抗體,其中PCSK9-1、PCSK9-7抗hPCSK9抗體的效價(jià)分別為和1:5000和1:100000。并且免疫后PCSK9-1、PCSK
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