新型HDAC抑制劑——苯達莫司汀化合物Nl-101的抗白血病作用及機制研究.pdf

1、研究目的:開發(fā)具有生物活性高、毒性低等特點的新藥一直是腫瘤治療研究領(lǐng)域的熱點，其中分子合成藥物由于能夠克服傳統(tǒng)化療藥物的缺陷而備受關(guān)注。NL-101是一種連接組蛋白去乙?；敢种苿㏒AHA以及烷化劑苯達莫司汀的活性基團而合成的化合物。本文探討這種化合物在體外和體內(nèi)對于白血病細胞的殺傷作用以及相關(guān)分子機制。
　　研究方法:采用MTT法檢測NL-101、SAHA和苯達莫司汀對多種白血病細胞系增殖能力的影響，用SPSS軟件計算半數(shù)抑制劑

2、量(IC50)，用CompuSyn軟件計算SAHA和苯達莫司汀的藥物聯(lián)合指數(shù)(CI);用流式細胞術(shù)分析藥物處理后細胞的周期和凋亡變化;Western blot檢測藥物處理后組蛋白H3乙?；?，以及蛋白凋亡和DNA損傷相關(guān)蛋白包括γ-H2AX、PARP、caspase-3、Bax、Bcl-2和Bcl-xL的表達;Ficoll法分離病人原代細胞，瑞氏染色觀察細胞經(jīng)藥物處理后的形態(tài)改變。體內(nèi)實驗部分，通過逆轉(zhuǎn)錄病毒感染構(gòu)建共表達AML1-E

3、TO和C-KIT突變的移植白血病小鼠模型，給予NL-101、苯達莫司汀和SAHA注射治療，動態(tài)監(jiān)測小鼠體重以及體內(nèi)白血病細胞浸潤情況，記錄各組小鼠生存期。
　　研究結(jié)果:在體外實驗中:(1)苯達莫司汀和SAHA在白血病細胞中具有協(xié)同作用。(2) NL-101對多種白血病細胞系的生長有明顯的抑制作用，其中Kasumi-1和NB4細胞的敏感性最為顯著;NL-101對正常細胞系的作用較小，顯示出對腫瘤細胞作用的選擇性;NL-101的抗增

4、殖能力顯著高于苯達莫司汀，與SAHA沒有顯著差異。(3) NL-101導(dǎo)致白血病細胞周期阻滯于S期，以及顯著的細胞凋亡。(4)NL-101的細胞毒性作用在分子水平上表現(xiàn)為激活依賴caspase-3的凋亡通路以及Bcl-2家族促凋亡蛋白;NL-101能增加DNA損傷標(biāo)志蛋白γ-H2AX和乙?；M蛋白H3的表達。(5) NL-101能誘導(dǎo)急性髓系白血病患者的原代細胞發(fā)生DNA損傷和細胞凋亡。在體內(nèi)實驗中:(1)成功建立共表達AML1-ETO

5、和C-KIT突變的移植白血病小鼠模型，造血器官中有大量原始細胞(c-Kit+、Gr1-、CD11b-)浸潤。(2)NL-101能抑制t(8;21)白血病細胞的增殖和浸潤，顯著延長白血病小鼠的生存期，具有比苯達莫司汀和SAHA更強的抗白血病活性。(3) NL-101對小鼠體重沒有顯著影響，小鼠的耐受性良好。
　　研究結(jié)論:由SAHA和苯達莫司汀的活性基團合成的新型藥物NL-101，在體內(nèi)及體外實驗中均具有抑制白血病細胞增殖以及誘導(dǎo)細