頭穴叢刺法調控大鼠腦梗死后內源性神經干細胞增殖遷移分化的研究.pdf

1、目的:室管膜下區(qū)(SVZ)是目前公認的成年個體神經干細胞最為集中的區(qū)域之一。SVz神經干細胞產生的祖細胞是SVZ細胞中最具特色的細胞群，它自產生起即具備發(fā)育為神經元的潛能，這使得SVZ神經干細胞成為研究神經干細胞發(fā)育的較佳模型。 本實驗選用Dil熒光染料預標記大鼠SVZ的原始細胞，后制備局灶性腦缺血模型，經頭穴叢刺法治療后，觀察該療法對SVz的神經干細胞增殖、遷移、分化的影響，以及該療法對腦缺血后FGF-2和NCAM含量的影響，

2、探討該療法通過對局部微環(huán)境的調控進而促進成年神經再生，修復和重建神經網(wǎng)絡的理論機制。 方法: (1)各組大鼠于立體定位儀上定坐標，將 10μL0.2％的熒光染料Dil注射于體質量250-300g的雄性Wistar大鼠側腦室以預標記室管膜下區(qū)細胞； (2)48h后采用血管內栓線法制備大鼠局灶性腦缺血模型； (3)Bederson神經功能評定方法評定大鼠神經功能缺損程度，評分低于2分者剔除； (4)將

3、造模后符合評分標準的大鼠隨機分為模型組、頭針組、頭穴叢刺法組，每組12只，假手術組4只，各時間點分組相同； (5)各組大鼠取材前，采用脈沖式的BrdU標記方法標記新生細胞； (6)普通光鏡觀察組織病理形態(tài)學的改變； (7)原位雜交法檢測FGF-2mRNA和NCAMmRNA的表達； (8)激光共聚焦顯微鏡檢測預標記原始SVZ神經干細胞后，再檢測雙重免疫熒光染色所確定的分化的細胞。 結果: (

4、1)治療前各組大鼠神經功能評分，無明顯差異，治療后頭穴叢刺法組與模型組比較有極顯著性差異，與頭針組比較有顯著性差異； (2) 頭穴叢刺法組HE染色顯示，該組24小時時間點多見壞死灶邊緣清晰，未見壞死過渡表現(xiàn)，21 天時間點多見梗死灶周圍毛細血管垂直長入，神經纖維新生； (3) 頭穴叢刺療法促進了FGF-2mRNA和NCAMmRNA在神經細胞漿、膠質細胞漿以及血管內皮的表達，與其他兩組比較有顯著性差異； (4)模型

5、組、頭針組、頭穴叢刺法組均可見Dil標記的室管膜下區(qū)細胞遷移至梗死周邊的紋狀體和皮質，并且分化成神經元或膠質細胞，頭穴叢刺法組Dil/BrdU/NeuN或Dil/BrdU/GFAP標記的細胞明顯增多，與其它兩組比較有顯著性差異； (5)頭穴叢刺法組BrdU/NeuN及BrdU/GFAP陽性細胞表達均多于其它兩組，組間比較有顯著性差異。 結論: (1)頭穴叢刺法促進局灶性腦缺血后大鼠神經功能康復，神經功能評分有明顯

6、改善； (2)頭穴叢刺法能使局灶腦缺血后腦組織中FGF-2mRNA及NCAMmRNA表達更高，表達時程更長； (3)頭穴叢刺法促進內源性FGF-2及NCAM合成增加可能是促進神經干細胞增殖的一個機制； (4)頭穴叢刺法能促進局灶腦缺血后腦組織神經生發(fā)中心SVZ區(qū)神經干細胞增殖，并且隨時間遞增減少其增殖衰減； (5)頭穴叢刺法可促進Dil標記的室管膜下區(qū)細胞均遷移至梗死周邊的紋狀體和皮質，并且分化成神經元或