頭穴叢刺法調(diào)控大鼠腦梗死后內(nèi)源性神經(jīng)干細(xì)胞增殖遷移分化的研究.pdf

1、目的:室管膜下區(qū)(SVZ)是目前公認(rèn)的成年個(gè)體神經(jīng)干細(xì)胞最為集中的區(qū)域之一。SVz神經(jīng)干細(xì)胞產(chǎn)生的祖細(xì)胞是SVZ細(xì)胞中最具特色的細(xì)胞群，它自產(chǎn)生起即具備發(fā)育為神經(jīng)元的潛能，這使得SVZ神經(jīng)干細(xì)胞成為研究神經(jīng)干細(xì)胞發(fā)育的較佳模型。 本實(shí)驗(yàn)選用Dil熒光染料預(yù)標(biāo)記大鼠SVZ的原始細(xì)胞，后制備局灶性腦缺血模型，經(jīng)頭穴叢刺法治療后，觀察該療法對(duì)SVz的神經(jīng)干細(xì)胞增殖、遷移、分化的影響，以及該療法對(duì)腦缺血后FGF-2和NCAM含量的影響，

2、探討該療法通過對(duì)局部微環(huán)境的調(diào)控進(jìn)而促進(jìn)成年神經(jīng)再生，修復(fù)和重建神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)的理論機(jī)制。 方法: (1)各組大鼠于立體定位儀上定坐標(biāo)，將 10μL0.2％的熒光染料Dil注射于體質(zhì)量250-300g的雄性Wistar大鼠側(cè)腦室以預(yù)標(biāo)記室管膜下區(qū)細(xì)胞； (2)48h后采用血管內(nèi)栓線法制備大鼠局灶性腦缺血模型； (3)Bederson神經(jīng)功能評(píng)定方法評(píng)定大鼠神經(jīng)功能缺損程度，評(píng)分低于2分者剔除； (4)將

3、造模后符合評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)的大鼠隨機(jī)分為模型組、頭針組、頭穴叢刺法組，每組12只，假手術(shù)組4只，各時(shí)間點(diǎn)分組相同； (5)各組大鼠取材前，采用脈沖式的BrdU標(biāo)記方法標(biāo)記新生細(xì)胞； (6)普通光鏡觀察組織病理形態(tài)學(xué)的改變； (7)原位雜交法檢測(cè)FGF-2mRNA和NCAMmRNA的表達(dá)； (8)激光共聚焦顯微鏡檢測(cè)預(yù)標(biāo)記原始SVZ神經(jīng)干細(xì)胞后，再檢測(cè)雙重免疫熒光染色所確定的分化的細(xì)胞。 結(jié)果: (

4、1)治療前各組大鼠神經(jīng)功能評(píng)分，無明顯差異，治療后頭穴叢刺法組與模型組比較有極顯著性差異，與頭針組比較有顯著性差異； (2) 頭穴叢刺法組HE染色顯示，該組24小時(shí)時(shí)間點(diǎn)多見壞死灶邊緣清晰，未見壞死過渡表現(xiàn)，21 天時(shí)間點(diǎn)多見梗死灶周圍毛細(xì)血管垂直長入，神經(jīng)纖維新生； (3) 頭穴叢刺療法促進(jìn)了FGF-2mRNA和NCAMmRNA在神經(jīng)細(xì)胞漿、膠質(zhì)細(xì)胞漿以及血管內(nèi)皮的表達(dá)，與其他兩組比較有顯著性差異； (4)模型

5、組、頭針組、頭穴叢刺法組均可見Dil標(biāo)記的室管膜下區(qū)細(xì)胞遷移至梗死周邊的紋狀體和皮質(zhì)，并且分化成神經(jīng)元或膠質(zhì)細(xì)胞，頭穴叢刺法組Dil/BrdU/NeuN或Dil/BrdU/GFAP標(biāo)記的細(xì)胞明顯增多，與其它兩組比較有顯著性差異； (5)頭穴叢刺法組BrdU/NeuN及BrdU/GFAP陽性細(xì)胞表達(dá)均多于其它兩組，組間比較有顯著性差異。 結(jié)論: (1)頭穴叢刺法促進(jìn)局灶性腦缺血后大鼠神經(jīng)功能康復(fù)，神經(jīng)功能評(píng)分有明顯

6、改善； (2)頭穴叢刺法能使局灶腦缺血后腦組織中FGF-2mRNA及NCAMmRNA表達(dá)更高，表達(dá)時(shí)程更長； (3)頭穴叢刺法促進(jìn)內(nèi)源性FGF-2及NCAM合成增加可能是促進(jìn)神經(jīng)干細(xì)胞增殖的一個(gè)機(jī)制； (4)頭穴叢刺法能促進(jìn)局灶腦缺血后腦組織神經(jīng)生發(fā)中心SVZ區(qū)神經(jīng)干細(xì)胞增殖，并且隨時(shí)間遞增減少其增殖衰減； (5)頭穴叢刺法可促進(jìn)Dil標(biāo)記的室管膜下區(qū)細(xì)胞均遷移至梗死周邊的紋狀體和皮質(zhì)，并且分化成神經(jīng)元或