骨髓間充質干細胞移植對嘌呤霉素氨基核苷腎病大鼠治療作用及對CD2AP表達的影響.pdf

1、目的：研究骨髓間充質干細胞對大鼠嘌呤霉素腎?。≒AN）足細胞上CD2分子連接蛋白(CD2AP)的影響，探討骨髓間充質干細胞(MSCs)對足細胞修復的可能機制，為MSCs移植治療腎病綜合征(Nephrotic syndrome，NS)提供實驗依據(jù)。
　　 方法：全骨髓貼壁篩選法體外分離、培養(yǎng)、擴增大鼠MSCs，流式細胞儀鑒定MSCs表面抗原，5-溴脫氧尿嘧啶核苷(5-bromodeoxyuridine，Brdu)對細胞進行標記；雄

2、性SD大鼠45只，隨機分為正常對照組(CON)，嘌呤霉素氨基核苷腎病模型組(NPM)，和骨髓間充質干細胞治療組(SCT)，每組15只。CON組不予處理，NPM組和SCT組一次性腹腔注射嘌呤霉素（150mg/kg），建立腎病模型。即日，SCT組腹主動脈注射1ml Brdu標記的三代骨髓間充質干細胞(106/ml),造模后第十天處死各組大鼠，行相關血尿生化指標檢測，留取腎組織標本，行光鏡、透射電鏡觀察病理變化，經Rt-PCR，Western

3、-blot及免疫熒光了解CD2AP表達變化。
　　 結果：①三代分離培養(yǎng)的MSCs成纖維狀，特異性好，流式細胞儀鑒定CD90表達陽性、CD45表達陰性。②實驗第10天，NPM組大鼠體重減輕，活動減少。出現(xiàn)腹水、大量蛋白尿、血白蛋白降低、膽固醇升高。與模型組比較，SCT組腹水減輕，尿蛋白、血膽固醇降低，血白蛋白回升，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。③電鏡下，CON組足細胞足突結構清晰、無融合現(xiàn)象，NPM組足細胞足突廣泛融合、變平

4、，而SCT組足突部分融合。④免疫熒光結果顯示經5-Brdu標記的MSCs在腎小球及腎小管聚集。⑤半定量RT-PCR結果表明，NPM組CD2AP mRNA相對表達量(0.501±0.017)較對照組(0.920±0.026)明顯下降，SCT組(0.821±0.011)與NPM組比較有所增加，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。⑥Wester-blot表明，NPM組CD2AP蛋白的相對表達量（0.703±0.010）較CON組（0.939±0

5、.078）明顯下降，SCT組（0.899生0.077）與模型組比較有所增加，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)；免疫熒光結果顯示模型組CD2AP表達呈不均勻、可見節(jié)段性缺失，從沿著毛細血管袢線性樣分布轉變?yōu)椴贿B續(xù)顆粒樣或節(jié)段性斑片狀分布，而治療組較模型組顯著好轉。
　　 結論：1、MSCs移植能減輕PAN腎病大鼠腹水，減少尿蛋白，提高血白蛋白，降低血膽固醇，對PAN腎病大鼠足突融合有一定的改善，對PAN腎病大鼠有治療作用。2、MS