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文檔簡(jiǎn)介
1、目的:研究骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞對(duì)大鼠嘌呤霉素腎?。≒AN)足細(xì)胞上CD2分子連接蛋白(CD2AP)的影響,探討骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(MSCs)對(duì)足細(xì)胞修復(fù)的可能機(jī)制,為MSCs移植治療腎病綜合征(Nephrotic syndrome,NS)提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
方法:全骨髓貼壁篩選法體外分離、培養(yǎng)、擴(kuò)增大鼠MSCs,流式細(xì)胞儀鑒定MSCs表面抗原,5-溴脫氧尿嘧啶核苷(5-bromodeoxyuridine,Brdu)對(duì)細(xì)胞進(jìn)行標(biāo)記;雄
2、性SD大鼠45只,隨機(jī)分為正常對(duì)照組(CON),嘌呤霉素氨基核苷腎病模型組(NPM),和骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞治療組(SCT),每組15只。CON組不予處理,NPM組和SCT組一次性腹腔注射嘌呤霉素(150mg/kg),建立腎病模型。即日,SCT組腹主動(dòng)脈注射1ml Brdu標(biāo)記的三代骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(106/ml),造模后第十天處死各組大鼠,行相關(guān)血尿生化指標(biāo)檢測(cè),留取腎組織標(biāo)本,行光鏡、透射電鏡觀察病理變化,經(jīng)Rt-PCR,Western
3、-blot及免疫熒光了解CD2AP表達(dá)變化。
結(jié)果:①三代分離培養(yǎng)的MSCs成纖維狀,特異性好,流式細(xì)胞儀鑒定CD90表達(dá)陽(yáng)性、CD45表達(dá)陰性。②實(shí)驗(yàn)第10天,NPM組大鼠體重減輕,活動(dòng)減少。出現(xiàn)腹水、大量蛋白尿、血白蛋白降低、膽固醇升高。與模型組比較,SCT組腹水減輕,尿蛋白、血膽固醇降低,血白蛋白回升,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。③電鏡下,CON組足細(xì)胞足突結(jié)構(gòu)清晰、無融合現(xiàn)象,NPM組足細(xì)胞足突廣泛融合、變平
4、,而SCT組足突部分融合。④免疫熒光結(jié)果顯示經(jīng)5-Brdu標(biāo)記的MSCs在腎小球及腎小管聚集。⑤半定量RT-PCR結(jié)果表明,NPM組CD2AP mRNA相對(duì)表達(dá)量(0.501±0.017)較對(duì)照組(0.920±0.026)明顯下降,SCT組(0.821±0.011)與NPM組比較有所增加,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。⑥Wester-blot表明,NPM組CD2AP蛋白的相對(duì)表達(dá)量(0.703±0.010)較CON組(0.939±0
5、.078)明顯下降,SCT組(0.899生0.077)與模型組比較有所增加,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);免疫熒光結(jié)果顯示模型組CD2AP表達(dá)呈不均勻、可見節(jié)段性缺失,從沿著毛細(xì)血管袢線性樣分布轉(zhuǎn)變?yōu)椴贿B續(xù)顆粒樣或節(jié)段性斑片狀分布,而治療組較模型組顯著好轉(zhuǎn)。
結(jié)論:1、MSCs移植能減輕PAN腎病大鼠腹水,減少尿蛋白,提高血白蛋白,降低血膽固醇,對(duì)PAN腎病大鼠足突融合有一定的改善,對(duì)PAN腎病大鼠有治療作用。2、MS
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