gpr128表達和定位研究及基因剔除打靶質(zhì)粒構(gòu)建.pdf

1、本文論述了G蛋白偶聯(lián)受體gpr128表達和定位研究及基因剔除打靶質(zhì)粒構(gòu)建。 G蛋白偶聯(lián)受體是最大的哺乳動物蛋白超家族之一，其作用是將信號跨膜傳遞給G蛋白，作為信號傳遞者參與生理轉(zhuǎn)化過程并可作為藥物治療靶點。受體分成五大家族：Glumate, Rhodopsin,Adhesion,Frizzled/Taste 2和Secretin。小鼠gpr128 為Adhesion家族成員，位于16 qC1.1，長71.664kb，包含16 個

2、外顯子，開放閱讀框為2358bp，蛋白產(chǎn)物有785個氨基酸，包括長N末端, GPCR 蛋白水解位點(GPS)和七個跨膜區(qū)(7TM),與人類GPR128同源性達69.9％。 半定量 RT-PCR 檢測示gpr128 僅表達于腸道。通過對0,1,2,4,8周小鼠的研究證實 gpr128表達不存在時相特異性。免疫組化實驗表明gpr128 在小鼠腸粘膜上皮細胞表達。 將成功克隆的gpr128全長 cDNA與pAcGFP1-N2載

3、體相連并轉(zhuǎn)染3T3細胞,真核表達載體形成的gpr128-EGFP融合蛋白定位于細胞膜，通過細胞實驗驗證了生物信息學分析結(jié)論。 由小鼠gpr128基因序列設(shè)計擴增同源臂：短臂長2.9kb,長臂3.2kb。同源臂插入載體后方向與PGK-neo 相反，預(yù)期以PGK-neo取代第4和第5外顯子為主共3479bp。打靶質(zhì)粒的構(gòu)建為基因剔除小鼠模型的建立和基因功能的研究打下基礎(chǔ)。 總之，通過基因表達分析gpr128主要表達在腸粘膜上