5-FU對乳腺癌細(xì)胞系MDA-MB-468中Bmi-1、Sca-1和Oct-4基因表達(dá)的影響.pdf

1、背景與目的:乳腺癌是女性最常見的惡性腫瘤,給女性的身心健康帶來了極大的危害?，F(xiàn)代乳腺癌治療的主要手段為手術(shù)切除輔以化學(xué)藥物治療、內(nèi)分泌治療及放射治療等綜合治療。雖然這些治療手段大大改善了乳腺癌患者的預(yù)后,但治療抵抗成為乳腺癌治療中的嚴(yán)重障礙,其中乳腺癌細(xì)胞對化療藥物的耐藥使得腫瘤易復(fù)發(fā)而難以徹底治愈。近年來提出的腫瘤干細(xì)胞學(xué)說認(rèn)為,腫瘤干細(xì)胞保留了正常干細(xì)胞的自我復(fù)制和多向分化的潛能,在腫瘤的發(fā)生、發(fā)展、侵襲、轉(zhuǎn)移、耐藥性及復(fù)發(fā)等過程中

2、發(fā)揮重要作用,乳腺癌腫瘤干細(xì)胞與化療耐藥等方面的關(guān)系成為研究的熱點(diǎn)。Bmi-1基因是多梳基因家族中的重要成員,具有轉(zhuǎn)錄抑制、維持干細(xì)胞自我更新的作用,Bmi-1可能為乳腺癌腫瘤干細(xì)胞的標(biāo)志物。國內(nèi)外時(shí)有報(bào)道Bmi-1在包括乳腺癌在內(nèi)的多種惡性腫瘤中高水平表達(dá),但少見乳腺癌細(xì)胞中Bmi-1與乳腺癌腫瘤干細(xì)胞及耐藥性關(guān)系相關(guān)報(bào)道;Sca-1和Oct-4基因在維持干細(xì)胞的活性和生物學(xué)特性中發(fā)揮重要作用,并與腫瘤干/祖細(xì)胞相關(guān),本實(shí)驗(yàn)中將其選取

3、為乳腺癌細(xì)胞系MDA-MB-468中腫瘤干細(xì)胞的標(biāo)志。本研究應(yīng)用了RT-PCR和Western blot技術(shù)半定量檢測了乳腺癌常用化療藥物之一5-FU持續(xù)干預(yù)下Bmi-1和干細(xì)胞因子Sca-1和Oct-4在人乳腺癌細(xì)胞系MDA-MB-468中的表達(dá)情況,以探討B(tài)mi-1表達(dá)與乳腺癌腫瘤干細(xì)胞、乳腺癌化療耐藥之間的關(guān)系,以加深對乳腺惡性腫瘤耐藥性和治療后復(fù)發(fā)等生物學(xué)行為機(jī)制的理解,發(fā)現(xiàn)新的乳腺癌治療分子靶點(diǎn)和提高化療療效。
　　材料

4、與方法:1.采用MTT法進(jìn)行檢測不同濃度(0.01μg/mL、0.1μg/mL、10μg/mL)的5-FU對人乳腺癌細(xì)胞MDA-MB-468的48h、72h增殖抑制情況,繪制細(xì)胞增殖抑制曲線,篩選合適的實(shí)驗(yàn)藥物濃度。
　　2.使用篩選出的合適濃度的5-FU持續(xù)干預(yù)人乳腺癌細(xì)胞MDA-MB-468連續(xù)傳代,收集細(xì)胞;加藥組為實(shí)驗(yàn)組,同時(shí)設(shè)置未加藥對照組,連續(xù)傳代培養(yǎng),收集細(xì)胞。
　　3.采用RT-PCR技術(shù)和Western b

5、lot技術(shù)分別檢測對照組及5-FU干預(yù)實(shí)驗(yàn)組的每一代細(xì)胞之Bmi-1及干細(xì)胞相關(guān)因子Sca-1、Oct-4的mRNA和蛋白的表達(dá)情況。
　　4.采用SPSS16.0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。Bmi-1、Sca-1及Oct-4不同代細(xì)胞間mRNA、蛋白表達(dá)水平比較采用單因素方差分析;而三指標(biāo)間關(guān)系則采用Pearson相關(guān)性分析。檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05。
　　結(jié)果:1.經(jīng)MTT實(shí)驗(yàn)檢測顯示5-FU明顯抑制人乳腺癌細(xì)胞系MDA-MB-468的

6、增殖,選取5-FU最適宜實(shí)驗(yàn)濃度為0.1μg/mL.
　　2. RT-PCR檢測顯示,在對照組中人乳腺癌細(xì)胞系MDA-MB-468不同代細(xì)胞間Bmi-1及Sea-1、Oct-4的mRNA表達(dá)相對值差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P＞0.05);實(shí)驗(yàn)組中,在0.1μg/mL的5-FU持續(xù)干預(yù)人乳腺癌細(xì)胞系MDA-MB-468過程中,不同代細(xì)胞間Bmi-1及Sca-1、Oct-4的mRNA表達(dá)相對值差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P＜0.05),并表現(xiàn)出以

7、下變化趨勢:先降低(第1代)-后升高(第2代)-繼續(xù)升高(第3代)-再降低(第4代)-再升高(第5代)-降低(第6代)。
　　3. Western blot檢測結(jié)果顯示,在對照組中人乳腺癌細(xì)胞系MDA-MB-468不同代細(xì)胞間Bmi-1及Sca-1、Oct-4的蛋白表達(dá)相對值差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P＞0.05);在實(shí)驗(yàn)組中,在0.1μg/mL的5-FU持續(xù)干預(yù)人乳腺癌細(xì)胞系MDA-MB-468過程中,不同代細(xì)胞間Bmi-1及Sca-

8、1、Oct-4的蛋白表達(dá)相對值差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P＜0.05),并表現(xiàn)出以下與上述mRNA變化相似的趨勢:先降低(第1代)-后升高(第2代)-繼續(xù)升高(第3代)-再降低(第4代)-再升高(第5代)-降低(第6代)。
　　4.Bmi-1與干細(xì)胞因子Sca-1、Oct-4的mRNA和蛋白表達(dá)水平均呈顯著正相關(guān)(r值接近1,均P＜0.01)。
　　結(jié)論:1.Bmi-1表達(dá)與干細(xì)胞因子Sca-1、Oct-4表達(dá)水平均呈顯著正相關(guān)