廣西HIV-1耐藥性及關聯(lián)因素研究與主要流行株亞型快速鑒定方法的建立.pdf

1、目的：調查廣西HIV-1耐藥性流行情況，并探討可能與耐藥性突變有關聯(lián)的因素；通過計算CRF01_AE、CRF07_BC和CRF08_BC發(fā)生PIs、NRTIs和NNRTIs主要耐藥性突變的基因屏障，從理論上比較不同亞型發(fā)生特定耐藥性突變的可能性大小，分析不同亞型的耐藥模式是否有差異。 方法：在廣西柳州、南寧兩市對304名HIV感染者/AIDS患者進行問卷調查，收集可能與HIV-1耐藥性有關聯(lián)的資料，并采集研究對象外周靜脈血，提取

2、病毒RNA，用巢式逆轉錄聚合酶鏈反應(nested RT-PCR)擴增編碼病毒蛋白酶1～99位氨基酸和逆轉錄酶1～285位氨基酸的核酸序列，通過測序獲得DNA序列。將序列提交到斯坦福大學HIV耐藥性數(shù)據(jù)庫，獲得耐藥性突變位點及耐藥水平有關信息。應用MEGA4軟件構建系統(tǒng)進化樹，分析樣本序列的亞型。將已接受抗病毒治療的患者按不同特征分組，用卡方檢驗或Fisher確切概率法比較不同對比組的耐藥率，分析研究對象特征與耐藥性的關聯(lián)性；通過查詢斯

3、坦福大學的HIV drug resistance database數(shù)據(jù)庫，確定PIs主要耐藥性突變21個、NRTIs主要耐藥性突變16個和NNRTIs主要耐藥性突變18個，對照密碼子表確定耐藥性密碼子及其對應的野生型密碼子種類。 結果：獲得219份DNA序列，其中86份來自接受抗病毒治療的患者，133份來自未治療者。經系統(tǒng)進化樹分析，鑒定出218份樣本的亞型，包括CRF01_AE176份，CRF07_BC26份，CRF08_BC

4、13份，B亞型2份，C亞型1份。蛋白酶抑制劑(PIs)、核苷類逆轉錄酶抑制劑(NRTIs)和核苷類逆轉錄酶抑制劑(NNRTIs)相關突變的發(fā)生率分別為6.9％(14/219)、30.14％(66/219)和14.16％(31/219)。CRF07_BC發(fā)生PIs相關突變的頻率高于CRF01_AE，CRF08_BC發(fā)生NRTIs相關突變的頻率高于CRF01_AE和CRF07_BC。PIs次要突變A71V/T主要出現(xiàn)于CRF07_BC，NR

5、TIs次要突變T69S主要出現(xiàn)于CRF08_BC。在219例患者中，至少對1種藥物低度以上耐藥者18例，總耐藥率8.22％(18/219)，其中治療患者耐藥率為17.44％(15/86)，未治療者耐藥率為2.26％(3/133)。在已經產生耐藥的患者中，對NRTIs和NNRTIs的高度耐藥分別占77.78％和72.22％，交叉耐藥的比例均高達100％，二重耐藥的比例也達77.78％。耐藥與治療時間，服藥依從性和職業(yè)有關，與性別、年齡、文

6、化程度、民族、病毒亞型、傳播途徑、治療方案等因素無關。治療1～2年與治療時間≥2年耐藥率的差異無顯著性意義，而治療時間1年以上者，耐藥率高于治療<1年者(OR=8.089，P<0.030)。服藥依從性為50～90％的患者，耐藥率高于服藥依從性≥90％者(OR=8.591，P=0.030)；農民患者的耐藥率高于其它職業(yè)和無業(yè)人員(OR=4.223，P=0.017)；農民患者服藥依從性低于其它職業(yè)和無業(yè)人員(P=0.007)；蛋白酶編碼區(qū)的

7、大多數(shù)野生型密碼子呈高度保守，只有L10和N88的野生型密碼子在3種亞型間有較大差異，但是由于發(fā)生L10V/I和N88D/S突變時所需的堿基替換種類和數(shù)量均相同，因而3種亞型的基因屏障沒有差異(P=1.000)。 結論：廣西HIV-1耐藥率處于較低的水平，但是對NRTIs和NNRTIs耐藥的患者多為高中度耐藥、交叉耐藥和二重耐藥?？共《局委煏r間、服藥依從性和職業(yè)因素與耐藥有關，抗病毒治療1年以上、服藥依從性低于90％、職業(yè)為農民

8、，耐藥率相對較高。農民耐藥率較高可能與服藥依從性較低有關，提供方便的取藥渠道，加強教育以提高農民患者服藥依從性可能有助于降低農民的耐藥率。感染不同亞型的患者耐藥率沒有差異，但是不同亞型耐藥模式有所不同，A71V/T主要出現(xiàn)于CRF07_BC，而T69S主要出現(xiàn)于CRF08_BC；本研究建立的多重巢式PCR法可準確鑒定CRF01_AE、CRF07_BC、CRF08_BC和B亞型毒株。該法具有較高的靈敏度、特異度和重復性，操作簡便快速、費用