人乳腺癌細(xì)胞侵襲相關(guān)miRNAs的篩選及hsa-miR-339-5p生物學(xué)功能的初步研究.pdf

1、背景：MicroRNAs (miRNAs)是一種不編碼蛋白質(zhì)的單鏈小分子RNA，廣泛存在于真核生物中，通過對(duì)靶基因的翻譯抑制或切割降解來(lái)調(diào)控基因的表達(dá)。miRNAs在生物體內(nèi)的作用多樣而關(guān)鍵，不僅參與胚胎發(fā)育、脂肪代謝、細(xì)胞增殖、分化和凋亡等過程，還與多種腫瘤的發(fā)生發(fā)展有關(guān)。其中已有的研究提示某些miRNAs的異常表達(dá)還與乳腺癌的不良預(yù)后有關(guān)。因此，miRNAs的生物學(xué)功能可能對(duì)乳腺癌的診斷和治療有著重要意義。
　　 目的：檢測(cè)

2、不同侵襲力乳腺癌細(xì)胞株中miRNAs的表達(dá)，篩選出與乳腺癌細(xì)胞侵襲力相關(guān)的miRNAs；檢測(cè)miR-339-5p在不同侵襲力乳腺癌細(xì)胞株中的表達(dá)，體外實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證miR-339-5p的表達(dá)與乳腺癌細(xì)胞侵襲力的關(guān)系，并應(yīng)用生物信息學(xué)方法預(yù)測(cè)其可能的靶基因。
　　 方法：培養(yǎng)人低侵襲乳腺癌細(xì)胞株（MCF-7）和高侵襲乳腺癌細(xì)胞株（MDA-MB-468），分別提取總RNA，利用miRNA芯片技術(shù)檢測(cè)847種miRNAs在這兩株細(xì)胞中的表達(dá)

3、，以不同侵襲力細(xì)胞株間miRNAs表達(dá)差異＞2倍為標(biāo)準(zhǔn)，篩選出與乳腺癌細(xì)胞侵襲力有關(guān)的miRNAs；挑選出顯著下調(diào)的miR-339-5p并用qRT-PCR方法驗(yàn)證其在MCF-7、MDA-MB-468和MDA-MB-231三種不同侵襲力乳腺癌細(xì)胞中的表達(dá)量；轉(zhuǎn)染外源性miR-339-5p inhibitors，通過CCK-8法與transwell侵襲實(shí)驗(yàn)分別檢測(cè)96小時(shí)內(nèi)細(xì)胞增殖力的變化和轉(zhuǎn)染后細(xì)胞侵襲能力的改變；應(yīng)用生物信息學(xué)方法，預(yù)測(cè)

4、侵襲相關(guān)乳腺癌細(xì)胞miRNAs可能的靶基因。
　　 結(jié)果：（1）與MCF-7相比，MDA-MB-468中共有81個(gè)差異表達(dá)的miRNAs，其中45個(gè)上調(diào)，36個(gè)下調(diào)。顯著上調(diào)的有miR-29 a、miR-29 c和miR-125b，顯著下調(diào)的有miR-339-5p和miR-365；（2）qRT-PCR實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示：miR-339-5p在MDA-MB-468和MDA-MB-231的表達(dá)量分別為在MCF-7中表達(dá)量的0.28和0.2

5、3；（3）與對(duì)照組相比，轉(zhuǎn)染miR-339-5p inhibitors后96小時(shí)內(nèi)細(xì)胞增殖力的變化無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P >0.05）；（4）與陰性熒光RNA和空白對(duì)照組相比，轉(zhuǎn)染miR-339-5p inhibitors后MCF-7細(xì)胞的侵襲力明顯增強(qiáng)（P<0.01）；（5）miR-339-5p有多個(gè)靶基因，可能參與調(diào)節(jié)細(xì)胞生長(zhǎng)、分化、凋亡、轉(zhuǎn)錄和信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)等多種過程。
　　 結(jié)論：（1）獲得與乳腺癌侵襲相關(guān)的miRNA表達(dá)譜，并驗(yàn)證