重癥肌無力特異性免疫吸附劑的制備及其性能研究.pdf

1、目的：制備一種對重癥肌無力（myasthenia gravis，MG）致病性抗乙酰膽堿受體（acetylcholine receptor，AChR）抗體具有特異性免疫吸附作用的特異性免疫吸附劑。通過對 MG患者血清的體外靜態(tài)吸附實驗及體外動態(tài)吸附實驗研究所制備的特異性免疫吸附劑對致病性抗 AChR抗體的吸附性能。通過對家兔的全血灌流體外循環(huán)實驗研究特異性免疫吸附劑的血液相容性。
　　方法：利用懸浮再生法制備10％的球型纖維素載體，

2、并以環(huán)氧氯丙烷對載體進行活化，環(huán)氧基含量可達92μmol/g。分別制備以球型纖維素為載體，以人工合成的人AChRα亞單位67-76位10氨基酸多肽為配基的MG特異性免疫吸附劑和以 L-色氨酸為配基的免疫吸附劑，并研究了反應條件對多肽固定量的影響。MG患者血清體外靜態(tài)吸附實驗將以1份免疫吸附劑與3倍體積的抗AChR抗體陽性的MG患者血清于37℃振蕩反應3h，應用酶聯(lián)免疫吸附法檢測吸附前后血清中抗體含量計算吸附率。同時比較相同載體不同配基的

3、兩種免疫吸附劑之間的吸附率差異。MG患者血清體外動態(tài)吸附實驗以1份特異性免疫吸附劑與10倍體積的抗AChR抗體陽性的MG患者血清在37℃條件下以2ml/min的速度循環(huán)反應4h，應用酶聯(lián)免疫吸附法檢測吸附前后血清中抗體含量計算吸附率。通過對家兔的全血灌流體外循環(huán)實驗研究所制備的MG特異性免疫吸附劑的血液相容性。血液相容性實驗將實驗動物分為球形纖維素載體對照組和以相同載體不同配基的實驗組。對3組實驗動物進行全血灌流體外循環(huán)實驗，于灌流前后

4、采血進行血常規(guī)、血漿離子和血漿蛋白濃度測定。所得數(shù)據(jù)進行灌流前后差數(shù) t檢驗，比較實驗本身及兩種免疫吸附劑對血液各項指標的影響。計算各項指標灌流后損失率，對兩種免疫吸附劑同一指標損失率進行t檢驗。
　　結果：多肽的最佳固定化條件為：最佳溫度37℃，最佳pH值9.7，最佳反應時間20h。多肽為配基的特異性免疫吸附劑對血清中的抗 AChR抗體的吸附率最高，為40.33%±2.29%。L-色氨酸為配基的免疫吸附劑對血清中的抗 AChR抗

5、體的吸附率也較高，為22.35%±1.47%。二者比較顯示差別有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。以球形纖維素為載體，多肽為配基所制備的特異性免疫吸附劑，在血清體外動態(tài)吸附實驗中對血清中的抗 AChR抗體的吸附率隨吸附時間的延長而上升，并在吸附開始后2h達到最高峰，吸附率可達26.59%。血液相容性實驗對照組實驗前后各項指標均無明顯變化（P>0.05）。實驗組灌流2h后血常規(guī)及血漿離子均無明顯變化（P>0.05），血漿蛋白明顯下降。多肽為配基

6、的特異性免疫吸附劑組實驗前后血漿總蛋白分別為57.50±2.52和46.50±3.32（g/L），血漿球蛋白分別為23.75±1.89和16.75±2.36（g/L），血漿白蛋白分別為33.75±2.63和29.50±1.91（g/L）(P<0.05)；L-色氨酸為配基的免疫吸附劑組實驗前后血漿總蛋白分別為60.50±7.68和51.00±9.42（g/L），血漿球蛋白分別為24.25±4.57和19.50±6.40（g/L），血漿白蛋

7、白分別為36.25±3.30和31.50±3.70（g/L）（P<0.05）。對兩種免疫吸附劑同一指標損失率進行 t檢驗，結果顯示兩種免疫吸附劑對血漿蛋白的吸附率沒有差異（P>0.05）。
　　結論：溫度、pH值、時間對多肽的固定量有直接影響。兩種免疫吸附劑對血清中的抗 AChR抗體的靜態(tài)吸附率有顯著性差異，多肽為配基的特異性免疫吸附劑動態(tài)吸附效果明顯，并具有良好的血液相容性。所以，以球型纖維素為載體、多肽為配基的特異性免疫吸附劑