胰十二指腸同源盒基因-1在人脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞分化為胰島分泌細(xì)胞中的作用.pdf

1、目的：
　　探討胰十二指腸同源盒基因-1（PDX-1）在人脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞（hADSC）分化為胰島分泌細(xì)胞中的作用。
　　方法：
　　將凍存的人脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞進(jìn)行復(fù)蘇，并隨機(jī)分為實(shí)驗(yàn)組與對照組，實(shí)驗(yàn)組：將攜帶胰十二指腸同源盒基因-1的病毒液（MOI（感染復(fù)數(shù)）=50）加入細(xì)胞懸液中，混合培養(yǎng)4小時(shí)后，去除含有病毒的培養(yǎng)液，更換新鮮的完全培養(yǎng)液，繼續(xù)培養(yǎng)至48小時(shí)，以保證轉(zhuǎn)染效果；對照組：采用不含病毒液的培養(yǎng)液培養(yǎng)48

2、小時(shí)。然后分別采用蛋白質(zhì)印跡法（Western-blotting）和細(xì)胞免疫熒光染色方法對感染結(jié)果進(jìn)行檢測。對感染后15天細(xì)胞利用雙硫腙(DTZ)染色觀察胰島素陽性反應(yīng)細(xì)胞，酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)檢測細(xì)胞胰島素的分泌量，細(xì)胞免疫熒光染色法檢測胰島分泌相關(guān)基因insulin1的表達(dá)。
　　結(jié)果：
　　（1）實(shí)驗(yàn)組的人脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞進(jìn)行病毒感染48h后，Western blot法和免疫熒光法均可檢測到PDX-1的表達(dá)，

3、對照組的細(xì)胞則無PDX-1的表達(dá)，并且感染的細(xì)胞在15d之后仍能檢測到PDX-1的表達(dá)。（2）實(shí)驗(yàn)組出現(xiàn)胰島素陽性細(xì)胞且被染成棕紅色，對照組未出現(xiàn)胰島素陽性細(xì)胞。（3）感染后15d，實(shí)驗(yàn)組和對照組細(xì)胞在低糖環(huán)境下分泌的胰島素量分別為(6.98±0.72)、(6.78±0.54) ng/mL，兩組比較，P＞0.05，無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；高糖環(huán)境下分泌的胰島素量分別為(13.38±0.66)、(6.50±0.64) ng/mL，兩組比較，P＜0.