原發(fā)性中樞神經(jīng)系統(tǒng)生殖細(xì)胞腫瘤細(xì)胞起源、c-kit基因突變和染色體i（12p）異常研究.pdf

1、原發(fā)性中樞神經(jīng)系統(tǒng)生殖細(xì)胞腫瘤(Centralnervoussystemgermcelltumors，CNSGCTs)是一組較為罕見(jiàn)的原發(fā)于中樞神經(jīng)系統(tǒng)內(nèi)的生殖細(xì)胞腫瘤。主要發(fā)生于兒童和青少年，其組織形態(tài)學(xué)和生物學(xué)行為與起源于性腺和其他性腺外的GCTs相似。CNSGCTs主要發(fā)生于身體中線部位，如丘腦、鞍區(qū)、第三腦室、基底節(jié)等部位。臨床癥狀與腫瘤發(fā)生部位密切相關(guān)。CNSGCTs組織學(xué)WHO分為生殖細(xì)胞瘤、畸胎瘤、卵黃囊瘤、胚胎性癌、絨毛

2、膜癌以及混合性腫瘤(Mixedgermcelltumors，MGCTs)。 與性腺GCTs相比，CNSGCTs臨床病理存在異質(zhì)性，特征獨(dú)特，診斷和治療有一定困難。本研究通過(guò)文獻(xiàn)復(fù)習(xí)，發(fā)現(xiàn)其在中國(guó)大陸呈較高發(fā)病率，且有升高趨勢(shì)。目前國(guó)內(nèi)關(guān)于CNSGCTs的研究多集中于個(gè)案報(bào)道和臨床分析，研究的病例數(shù)較少，罕見(jiàn)全面的臨床、病理及免疫組織化學(xué)特征的研究，對(duì)CNSGCTs分子遺傳學(xué)方面的研究在國(guó)內(nèi)尚未見(jiàn)報(bào)道。 本研究：①了解CN

3、SGCTs的臨床病理和免疫組化特征，探討CNSGCTs的細(xì)胞起源；②檢測(cè)CNSGCTsc-kit基因突變情況。③應(yīng)用FISH技術(shù)檢測(cè)CNSGCTs12號(hào)染色異常，選擇位于12p上的可能候選抑癌基因p27kipl進(jìn)行研究。 第一部分：收集23例原發(fā)性CNSGCTs患者的臨床資料，應(yīng)用HE染色、免疫組織化學(xué)技術(shù)對(duì)CNSGCTs的臨床病理和免疫組織化學(xué)特征(腫瘤組織PLAP、OCT3/4和c-kit蛋白表達(dá))進(jìn)行分析。本組23例患者分

4、別占同期CNS腫瘤和性腺外惡性GCTs的8.7％和37.6％，主要發(fā)生于兒童和青少年，平均年齡16.9歲(7～36歲)，73.9％的患者年齡小于20歲，52.2％的患者年齡在11～20歲間。CNSGCTs好發(fā)于男性，男：女之比為3.6:1。患者術(shù)前病程5天～5年，平均10.4月。主要發(fā)生于松果體，鞍區(qū)、第三腦室、下丘腦等身體中線部位，脊髓和基底節(jié)相對(duì)少見(jiàn)。臨床癥狀與發(fā)病部位密切相關(guān)，常見(jiàn)有頭痛、惡心、嘔吐、多飲、多尿、復(fù)視、斜視、視力下

5、降、四肢感覺(jué)異常、麻痹、行走不穩(wěn)等，呈非特異性CNS占位性病變的表現(xiàn)，但CNSGCTs臨床癥狀也有其異質(zhì)性，23例中青春期前患者外生殖器成人型伴有性早熟4例，性欲減退、毛發(fā)脫落1例，生長(zhǎng)發(fā)育遲緩、Cushing面容1例，閉經(jīng)1例。腫瘤大小1.5×1×1cm至6×5.5×4cm不等。組織學(xué)上生殖細(xì)胞瘤占73.9％，21.7％為畸胎瘤(teratoma,T)(17.4％為成熟性畸胎瘤(MT)，4.3％為未成熟性畸胎瘤(IT))，4.3％為M

6、GCTs。隨訪患者中除MT外，均行放療，隨訪成功16例患者中僅1例于術(shù)后2周死亡，其余患者腫瘤未見(jiàn)復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移。 23例患者中17例生殖細(xì)胞瘤和1例MGCT中生殖細(xì)胞瘤成分均不同程度地表達(dá)原始生殖細(xì)胞(PGCs)特異性標(biāo)記OCT3/4，c-kit和PLAP(生殖細(xì)胞瘤中的表達(dá)分別為100％，100％和76.5％)。1例MGCT中卵黃囊瘤成分c-kit+/PLAP-/OCT3/4-，胚胎性癌成分c-kit-/PLAP+/OCT3/4

7、+。5例畸胎瘤(MT和IT)OCT3/4，c-kit和PLAP均不表達(dá)。23例腫瘤均發(fā)生于身體中線部位，與胚胎發(fā)育過(guò)程中PGCs游走路線一致。組織形態(tài)學(xué)類(lèi)似性腺及性腺外其它部位的GCTs。以上幾點(diǎn)均支持CNSGCTs起源于胚胎發(fā)育過(guò)程中游走錯(cuò)誤的原始生殖細(xì)胞理論。 與性腺和其它性腺外GCTs相比，CNSGCTs因發(fā)病部位特殊，臨床病理特征較獨(dú)特，有時(shí)手術(shù)難度大，送檢組織非常小，病理診斷困難。OCT3/4，c-kit和PLAP在生

8、殖細(xì)胞瘤中的廣泛表達(dá)將為CNSGCTs的診斷和鑒別診斷提供極大幫助。 第二部分：采用PCR擴(kuò)增，直接測(cè)序的方法對(duì)18例原發(fā)性CNSGCTs中c-kit基因第9，11，13，17號(hào)外顯子突變情況進(jìn)行檢測(cè)。23例CNSGCTs中2例生殖細(xì)胞瘤因組織太小DNA抽提失敗，3例(2例畸胎瘤和1例生殖細(xì)胞瘤)雖然擴(kuò)增出目標(biāo)基因片段，但未達(dá)到測(cè)序濃度要求。18例中1例生殖細(xì)胞瘤發(fā)生了c-kit基因突變，突變率為5.6％(1/18)，發(fā)生于11

9、號(hào)外顯子，突變類(lèi)型為框內(nèi)缺失，位于11號(hào)外顯子近膜區(qū)的5’端第557、558密碼子處，為氨基酸WK(Trp-Lys)缺失，屬功能性突變。未發(fā)現(xiàn)有9號(hào)、13號(hào)、17號(hào)外顯子的突變。本組c-kit基因突變發(fā)生率與文獻(xiàn)報(bào)道性腺GCTs有相似之處(發(fā)生率為5～30％，主要表現(xiàn)為17和11號(hào)外顯子突變)。c-kit基因突變改變了蛋白構(gòu)象，導(dǎo)致KIT持續(xù)性非配體依賴(lài)的磷酸化，對(duì)細(xì)胞形成持續(xù)的增殖信號(hào)，導(dǎo)致細(xì)胞增生。c-kit基因突變可能在CNSGC

10、Ts發(fā)生、發(fā)展中起一定的作用，同時(shí)c-kit基因突變的存在和c-kit蛋白的強(qiáng)表達(dá)為酪氨酸激酶抑制劑伊馬替尼治療CNSGCTs提供了理論依據(jù)。 第三部分：采用12號(hào)染色體計(jì)數(shù)探針(CEP12，著絲粒，橘黃色)和12號(hào)染色體端粒探針(TelVysion12p，端粒，綠色)雙色FISH技術(shù)檢測(cè)23例CNSGCTs(福爾馬林固定，石蠟包埋組織切片)是否存在12號(hào)染色體異常，尤其是i(12p)的改變，為12p上候選基因的研究提供理論依據(jù)

11、。研究12號(hào)染色體異常的發(fā)生率和異常類(lèi)型，以及CNSGCTs12號(hào)染色體異常與患者性別、年齡、腫瘤大小及Ki-67LI有無(wú)相關(guān)性。選擇12p上可能的候選抑癌基因p27kipl進(jìn)行研究，探討其在CNSGCTs中表達(dá)情況以及與12p異常和Ki-67LI的關(guān)系，為判斷預(yù)后提供可能的理論依據(jù)。 23例CNSGCTs11例出現(xiàn)12p異常(47.8％)，其中9例(39.1％)為i(12p)異常，4例為12p(17.4％)擴(kuò)增，既有i(12p

12、)異常又有12p擴(kuò)增2例(8.7％)。1例MGCT患者在生殖細(xì)胞瘤和卵黃囊瘤成分中均檢測(cè)到i(12p)異常，胚胎性癌成分未檢測(cè)到12p異常。4例成熟性畸胎瘤、1例未成熟性畸胎瘤和6例生殖細(xì)胞瘤均未檢測(cè)到12p的異常。在不同的組織學(xué)類(lèi)型中i(12p)和12p擴(kuò)增發(fā)生率不同，17例生殖細(xì)胞瘤中i(12p)異常和12p擴(kuò)增的發(fā)生率分別為47.1％和23.5％。5例畸胎瘤(4例MT，1例IT)中i(12p)異常和12p擴(kuò)增的發(fā)生率均為0。12號(hào)

13、染色體異常與患者性別、年齡、腫瘤大小及Ki-67LI無(wú)顯著相關(guān)性。 23例CNSGCTs，p27kipl強(qiáng)表達(dá)4例(17.4％)，均為畸胎瘤(3例MT，1例IT)。弱表達(dá)6例(26.1％)(1例MT，5例生殖細(xì)胞瘤)，表達(dá)缺失13例(56.5％)(12例生殖細(xì)胞瘤和1例MGCT)，MGCT中生殖細(xì)胞瘤、卵黃囊瘤和胚胎性癌各成分p27kipl表達(dá)均缺失。p27kipl表達(dá)與12p擴(kuò)增無(wú)相關(guān)性。p27kipl表達(dá)與：Ki-67LI呈