5和5-F35型腺病毒載體對人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞感染效率的比較.pdf

1、[目的]:探討5和5/F35型腺病毒載體對體外培養(yǎng)的人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(HumanBone Marrow Mesenchymal Stem Cells,hBMSCs)的感染效率。
　　 [方法]:實(shí)驗(yàn)于2008-03/2008-10在解放軍北京軍區(qū)總醫(yī)院血液科實(shí)驗(yàn)室完成。先用淋巴細(xì)胞分離液分離健康供者的骨髓單個核細(xì)胞,然后采用密度梯度離心和貼壁篩選的方法體外分離培養(yǎng)hBMSCs,傳至第3代后用流式細(xì)胞儀檢測hBMSCs表型;按1

2、×104密度接種于24孔板,細(xì)胞貼壁后分別換用成骨、成脂誘導(dǎo)液培養(yǎng),以堿性磷酸酶、油紅O染色檢測其分化特性。用不同滴度編碼增強(qiáng)型綠色熒光蛋白(EGFP)基因的腺病毒載體(Ad5 EGFP和Ad5/F35 EGFP)感染體外培養(yǎng)的hBMSCs和人白血病細(xì)胞系(K562,U937和HL60),熒光顯微鏡觀察、流式細(xì)胞儀檢測EGFP陽性表達(dá)率,并用臺盼藍(lán)拒染法檢測不同病毒滴度感染后hBMSCs活細(xì)胞比例。
　　 [結(jié)果]:hBMSCs

3、表面CD166、CD29、CD73、CD31、CD45、CD34和CD14陽性率分別為95.08％、99.53％、72.26％、1.5％、2.02％、3.8％和4.94％。hBMSCs成骨誘導(dǎo)后14d堿性磷酸酶染色為陽性,成脂誘導(dǎo)后14d油紅O染色為陽性,提示hBMSCs已分化為成骨細(xì)胞和脂肪細(xì)胞。Ad5 EGFP和Ad5/F35 EGFP按5、20、100和400感染復(fù)數(shù)(MOI)分別感染hBMSCs,2d后流式細(xì)胞儀檢測EGFP表達(dá)

4、的陽性率,前者EGFP陽性率分別為(0.72±0.14)％、(4.97±0.46)％、(9.80±3.43)％和(45.53±6.32)％;后者EGFP陽性率分別為(24.31±10.55)％、(55.19±13.73)％、(87.68±9.5)％和(96.57±5.64)％。在5、20和100 MOI,各組細(xì)胞存活率均在95％以上。在400 MOI,細(xì)胞存活率明顯降低,在90％以下。對人白血病細(xì)胞系(K562,U937和HL60)在M

5、OI為100時Ad5/F35載體的感染效率大于50％,Ad5載體不能有效感染人白血病細(xì)胞系(K562,U937和HL60)。
　　 [結(jié)論]:5和5/F35型腺病毒載體對hBMSCs的感染效率有明顯差別。兩型腺病毒載體感染hBMSCs的效率與病毒的感染復(fù)數(shù)成正比,感染復(fù)數(shù)愈高其感染hBMSCs的效率愈高:在相同的感染復(fù)數(shù)時,5/F35型腺病毒載體感染hBMSCs和人白血病細(xì)胞系(K562,U937和HL60)的效率明顯地高于5型