莫尼茨屬絳蟲(chóng)節(jié)片間部分差異基因表達(dá)的研究.pdf

1、本論文通過(guò)前期研究所構(gòu)建的擴(kuò)展莫尼茨絳蟲(chóng)基因的質(zhì)粒文庫(kù)，在表達(dá)量較大且節(jié)片間表達(dá)差異顯著的基因中克隆了5個(gè)擴(kuò)展莫尼茨絳蟲(chóng)功能基因進(jìn)行研究?；虻馁|(zhì)粒文庫(kù)編號(hào)分別為SSBR88,SSBR116,SSBR126,SSBR210和SSBR614?；蚩寺y(cè)序后獲得5個(gè)基因的全長(zhǎng)mRNA序列，登錄GenBank并進(jìn)行在線Blast分析。GenBank登錄號(hào)為GO254238-GO254242。然后用生物信息學(xué)方法對(duì)基因進(jìn)行分析并同時(shí)應(yīng)用SYBR

2、 Green real-time PCR檢測(cè)方法探討基因在莫尼茨屬兩種絳蟲(chóng)成蟲(chóng)的頭節(jié)、幼節(jié)、成節(jié)、孕節(jié)四個(gè)不同發(fā)育階段組織的轉(zhuǎn)錄差異。最后對(duì)擴(kuò)展莫尼茨絳蟲(chóng)孕節(jié)特有高表達(dá)的SSBR88類(lèi)膜蛋白樣基因通過(guò)構(gòu)建表達(dá)載體進(jìn)行蛋白質(zhì)表達(dá)與初步分析。
　　 序列分析結(jié)果表明我們成功獲得了5個(gè)基因的全長(zhǎng)mRNA序列，經(jīng)BLastX比對(duì)其中SSBR116、SSBR210分別和肝片吸蟲(chóng)的烯醇化酶和日本血吸蟲(chóng)的β微管蛋白的基因最高相似度分別達(dá)74.

3、8％和80％，推測(cè)這兩個(gè)基因分別為擴(kuò)展莫尼茨絳蟲(chóng)的烯醇化酶和β微管蛋白基因。另外SSBR88,SSBR126,SSBR614 3個(gè)基因與數(shù)據(jù)庫(kù)中已有基因的相似性比較低，推測(cè)為擴(kuò)展莫尼茨絳蟲(chóng)特有基因，根據(jù)蛋白結(jié)構(gòu)分別推斷為擴(kuò)展莫尼茨絳蟲(chóng)的類(lèi)膜蛋白樣基因、類(lèi)抗原蛋白樣基因和類(lèi)絨毛膜蛋白樣基因。
　　 實(shí)時(shí)定量RT-PCR實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，5個(gè)基因在兩種蟲(chóng)體上的mRNA表達(dá)差異趨勢(shì)一致。烯醇化酶(SSBR116)的mRNA表達(dá)差異顯著，其

4、從高到低依次為成節(jié)、幼節(jié)、孕節(jié)、和頭節(jié)。烯醇化酶作為糖代謝的主要酶類(lèi)，提示其在蟲(chóng)體寄生過(guò)程中進(jìn)行胞內(nèi)物質(zhì)代謝從而為生命活動(dòng)提供能量起重要作用。Β-微管蛋白(SSBR210)在成節(jié)的mRNA表達(dá)豐度最高，作為細(xì)胞微管結(jié)構(gòu)和細(xì)胞分裂過(guò)程中紡錘體結(jié)構(gòu)的基本組成成分，提示該基因?qū)S持莫尼茨絳蟲(chóng)的細(xì)胞形態(tài)與功能和細(xì)胞分裂以及配子形成等具有重要作用。未知蛋白SSBR88作為類(lèi)膜蛋白樣基因，生物信息學(xué)分析為分泌表達(dá)的跨膜蛋白，其mRNA在孕節(jié)的表達(dá)豐

5、度最高，提示該蛋白可能在蟲(chóng)卵形成過(guò)程中與卵膜結(jié)構(gòu)的形成相關(guān)。另外，SSBR126作為新的類(lèi)抗原蛋白樣基因，其也在孕節(jié)的mRNA表達(dá)豐度最高，它的作用還有待進(jìn)一步的實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證。SSBR614在線分析和小鼠的絨毛膜有一定的相似性，其在成節(jié)的mRNA表達(dá)豐度最高，提示我們?cè)摶蚺c絳蟲(chóng)的雌性生殖器官某個(gè)結(jié)構(gòu)的生成有關(guān)。
　　 本論文在構(gòu)建擴(kuò)展莫尼茨絳蟲(chóng)基因質(zhì)粒文庫(kù)的基礎(chǔ)上，通過(guò)對(duì)其5個(gè)差異表達(dá)基因進(jìn)行克隆和生物信息學(xué)分析，同時(shí)應(yīng)用SYBR