酪氨酯羥化酶基因啟動子調(diào)控外源性Calbindin D-28k特異性表達轉(zhuǎn)基因小鼠的鑒定.pdf

1、目的：檢測酪氨酸羥化酶(Tyrosine hydroxylase，TH)基因啟動子調(diào)控外源性Calbindin D-28k特異性表達轉(zhuǎn)基因小鼠腦內(nèi)不同區(qū)域鈣結(jié)合蛋白D-28k( Calbindin D-28k，CaBP)特異性表達情況，以驗證已建立的轉(zhuǎn)基因小鼠系。
　　 方法：提取轉(zhuǎn)基因小鼠DNA，聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(polymerase chain reaction，PCR)檢測轉(zhuǎn)入的外源性Calbindin D-28k。篩選出攜

2、帶該目的基因的陽性小鼠，擴群。免疫熒光觀察轉(zhuǎn)基因小鼠和正常小鼠的嗅球（Olfactory Bulb，OB）、黑質(zhì)（Substantia Nigra，SN）、海馬（hippocampus，Hi）、小腦(cerebellum，CB)及大腦皮層( cerebral Cortex，CC)中CaBP陽性細胞的數(shù)量和與TH共表達情況。選取穩(wěn)定表達外源性Calbindin D-28k小鼠設(shè)為轉(zhuǎn)基因組(Tg)，未表達外源性基因的小鼠設(shè)為轉(zhuǎn)基因陰性對照組

3、(nTg)，野生型小鼠為正常對照組（wild）。蛋白質(zhì)印跡方法檢測三組小鼠上述五個區(qū)域CaBP的表達量。
　　 結(jié)果：PCR檢測4只轉(zhuǎn)基因陽性原代鼠的子代，結(jié)果顯示，2只原代鼠能穩(wěn)定遺傳外源性Calbindin D-28k。取2號原代鼠F1代作為種子，擴群繁殖，F(xiàn)3、F4代中外源性Calbindin D-28k都能穩(wěn)定遺傳，轉(zhuǎn)基因小鼠數(shù)量達到35只，用2號原代鼠初步建立轉(zhuǎn)基因小鼠系。
　　 進一步檢測轉(zhuǎn)基因小鼠外源性Ca

4、lbindin D-28k在腦內(nèi)不同部位的特異性表達，免疫熒光結(jié)果顯示，轉(zhuǎn)基因小鼠嗅球、黑質(zhì)的CaBP陽性細胞數(shù)顯著多于正常鼠(P＜0.05）。而海馬、小腦、大腦皮層的CaBP陽性細胞數(shù)與正常小鼠無明顯差異。
　　 蛋白質(zhì)印跡結(jié)果顯示，轉(zhuǎn)基因組小鼠嗅球及中腦黑質(zhì)部CaBP表達量顯著高于轉(zhuǎn)基因陰性組和正常組小鼠（P＜0.05）。而海馬、小腦、大腦皮層的CaBP表達量與轉(zhuǎn)基因陰性組和正常組小鼠無明顯差異。轉(zhuǎn)基因陰性組小鼠上述五個區(qū)域