錦鯉皰疹病毒Nested-PCR檢測方法的建立及初步應用.pdf

1、錦鯉皰疹病毒(KoiHerpesvirus，KHV)是錦鯉皰疹病毒病(KoiHerpesvirusDisease，KHVD)的病原，它主要感染錦鯉和鯉魚，魚苗和成魚死亡率均達到80％以上。1998年在以色列，美國和德國分別有報道分離到該病毒，目前，世界上已有多個國家暴發(fā)過錦鯉皰疹病毒病。我國的東北地區(qū)在近兩年也有報道發(fā)生過錦鯉皰疹病毒病。該病能引起魚的鰓壞死，腎炎和眼窩凹陷等癥狀。KHV所帶來的高致死率和長期潛伏感染已引起國際獸疫局(O

2、IE)的高度關注，同時我國在2008年，農(nóng)業(yè)部第1125號公告中，將錦鯉皰疹病毒病列為二類動物疫病。
　　 本試驗在國內外KHVPCR檢測方法的基礎上，建立了KHVNested-PCR檢測方法，優(yōu)化了引物濃度，退火溫度和循環(huán)次數(shù)等反應條件，該PCR檢測方法的靈敏度為0.01pg。針對擴增到的目的片段，進行分離純化測序，并與目前已經(jīng)完整測序的3株KHV進行比對，相似程度達到98％以上，蛋白比對結果也表明該蛋白屬于KHV病毒粒子的相

3、關蛋白。試驗中擴增的ORF26基因片段經(jīng)過軟件分析，有著良好的抗原性，有可能成為基因工程疫苗的目的片段。
　　 本研究還對我國江蘇，浙江，安徽和山東等地部分城市的錦鯉，食用鯉魚和鯽魚進行錦鯉皰疹病毒的分子流行病學檢測。在南京等8個城市或地區(qū)發(fā)現(xiàn)有錦鯉皰疹病毒基因組DNA的存在。另外，本試驗首次在我國的鯽魚中檢測到錦鯉皰疹病毒的存在。
　　 試驗中大部分樣品魚體征正常，無明顯的眼觀病變，但通過本試驗的Nested-PCR檢