利用CRISPR-Cas9系統(tǒng)構(gòu)建MC3R基因敲除豬.pdf

1、黑素皮質(zhì)素受體（Melanocortin Receptors，MCRs）是G-蛋白偶聯(lián)受體，迄今為止共發(fā)現(xiàn)五個成員，在黑素皮質(zhì)素(Melanocortin，MC)刺激下，都能夠增加胞內(nèi)cAMP的濃度，啟動胞內(nèi)信號。但是MCRs各成員間生理作用迥異，其中MC3R基因在下丘腦中高表達，對控制動物食欲和調(diào)節(jié)能量平衡中發(fā)揮重要作用:MC3R基因的突變與人類肥胖密切相關(guān)，被認為是代謝綜合癥相關(guān)的候選基因;此外，豬的采食和能量分配對其生長速度、胴體

2、瘦肉率等經(jīng)濟性狀具有重要影響，所以MC3R基因在豬的育種上也具有潛在的應用價值。但其確切生理功能、作用機制還不清楚?；蚯贸齽游锬Ｐ褪谴_定一個基因生理功能的最佳材料，但至今未見MC3R基因敲除豬模型的報道。與嚙齒類動物模型相比，豬的各項生理指標與人類更為接近，所以建立MC3R基因敲除模型豬不僅可以用于明確MC3R的生理作用，為治療肥胖綜合癥提供新的思路和方法，還可以評估其在豬分子育種中的價值。
　　本文采用新型基因組編輯技術(shù)CRI

3、SPR/Cas9系統(tǒng)，在中國實驗用小型豬(Chinese Experimental Mini pig，CEMP)MC3R基因起始密碼子的上游12bp、終止密碼子下游45 bp以及MC3R基因的CDS區(qū)起始密碼子下游288 bp和終止密碼子上游61 bp設(shè)計四個MC3R基因敲除靶位點，構(gòu)建MC3R-pX330基因敲除載體并驗證各載體的打靶效率。利用構(gòu)建好的MC3R-pX330基因敲除載體，通過電擊法轉(zhuǎn)染豬胎兒成纖維細胞，篩選獲得具有G41