基于CRISPR-Cas9技術(shù)建立ATRX基因敲除的HeLa細(xì)胞系.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、Ⅱ型CRISPR/Cas9系統(tǒng)通過sgRNA識別目標(biāo)基因組序列，介導(dǎo)Cas9對DNA進(jìn)行切割，從而引入DNA雙鏈斷裂(double-strand breaks，DSBs)。非同源末端結(jié)合(non-homologous end joining，NHEJ)方式修復(fù)DSBs易發(fā)生基因突變從而實(shí)現(xiàn)特定基因的敲除。腫瘤細(xì)胞需要有維持端粒長度的機(jī)制來實(shí)現(xiàn)無限分裂。
　　研究表明約85％的腫瘤依賴端粒酶的激活，15％的腫瘤則依賴端粒的替代延長機(jī)

2、制(alternativelengthening telomeres，ALT)通過同源重組的方式維持端粒長度。胰腺內(nèi)分泌細(xì)胞瘤、腦膠質(zhì)細(xì)胞瘤等多種腫瘤細(xì)胞中發(fā)現(xiàn)ATRX基因失活與端粒的替代延長機(jī)制緊密相關(guān)。為進(jìn)一步揭示ATRX在ALT激活中的作用和ATRX對腫瘤發(fā)生的作用，本課題利用CRISPR/Cas9技術(shù)建立ATRX基因敲除的HeLa細(xì)胞系。通過Western-blot在蛋白水平鑒定ATRX的表達(dá)和Sanger測序在DNA水平鑒定A

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