膿毒癥患者IL-32的差異及PB1對(duì)LPS介導(dǎo)的THP-1源性巨噬細(xì)胞炎癥反應(yīng)的抑制作用.pdf

1、目的:膿毒癥是急診醫(yī)學(xué)面臨的重要問(wèn)題之一，其病情進(jìn)展快，病死率高，每年發(fā)病率不斷上升，而LPS與TLR4受體通路在其發(fā)病機(jī)制中起到重要作用，LPS通過(guò)激動(dòng)TLR4信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)，促使單核與巨噬細(xì)胞產(chǎn)生大量炎癥介質(zhì)，對(duì)炎癥過(guò)度反應(yīng)，導(dǎo)致膿毒癥發(fā)生發(fā)展?，F(xiàn)有研究表明一種近年來(lái)新發(fā)現(xiàn)的細(xì)胞因子IL-32與TLR-4受體通路密切相關(guān)，可與TNF-α相互刺激分泌，導(dǎo)致炎癥反應(yīng)加劇。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)比較膿毒癥患者血清中TNF-α與IL-32的含量關(guān)系，并通過(guò)細(xì)

2、胞造模研究原花青素B1(PB1)與TLR-4受體阻斷劑CLI-095對(duì)LPS刺激下THP-1細(xì)胞源性巨噬細(xì)胞分泌TNF-α與IL-32的作用。探討IL-32在膿毒癥中發(fā)揮的作用及可能的機(jī)制。
　　方法:臨床研究:按膿毒癥診斷標(biāo)準(zhǔn)，選取我院急診科2015.05-2016.4期間收治32例膿毒癥患者，根據(jù)結(jié)局分為死亡組與非死亡組，采集入院后第1、3、5、7、14日清晨血清樣本，用ELISA法檢測(cè)每樣本的TNF-α與IL-32濃度。細(xì)胞

3、實(shí)驗(yàn):穩(wěn)定傳代的THP-1細(xì)胞，經(jīng)PMA誘導(dǎo)48h轉(zhuǎn)化為巨噬細(xì)胞，用CCK-8法檢測(cè)PB1對(duì)細(xì)胞的毒性作用。將誘導(dǎo)后細(xì)胞分為空白對(duì)照組，CLI-0955μg/ml預(yù)孵組，CLI-09510μg/ml預(yù)孵組，PB12.5μg/ml預(yù)孵組，PB15μg/ml預(yù)孵組，PB110μg/ml預(yù)孵組，PB120μg/ml預(yù)孵組，0加藥組共8組。按相應(yīng)組別加藥后孵育4小時(shí)，每組加入LPS100ng/ml，18小時(shí)后取細(xì)胞培養(yǎng)上清檢測(cè)TNF-α與IL-

4、32濃度。將收集的數(shù)據(jù)結(jié)果應(yīng)用SPSS22.0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)描述，用ANOVA等方式檢驗(yàn)各組數(shù)據(jù)間差異，取P＜0.05時(shí)認(rèn)為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)果:臨床研究中32例患者，在多數(shù)檢測(cè)時(shí)間點(diǎn)死亡組患者的血清中TNF-α與IL-32濃度明顯高于非死亡組，差別經(jīng)檢驗(yàn)具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。細(xì)胞實(shí)驗(yàn)中成功地對(duì)THP-1細(xì)胞進(jìn)行了誘導(dǎo)，使其轉(zhuǎn)化為巨噬細(xì)胞。并在此基礎(chǔ)上用LPS100ng/ml刺激細(xì)胞，建立了“膿毒癥”細(xì)胞模型，以模仿膿毒癥

5、在人體內(nèi)發(fā)生過(guò)程。用CLI-095阻斷TLR4信號(hào)通路可明顯降低LPS刺激下THP-1細(xì)胞源性巨噬細(xì)胞細(xì)胞因子TNF-α與IL-32的產(chǎn)生。PB1亦起到CLI-095相似的抗炎作用，并在一定的PB1濃度范圍內(nèi)呈劑量依賴性。PB1對(duì)處于炎癥反應(yīng)中的THP-1細(xì)胞源性巨噬細(xì)胞發(fā)揮最大的保護(hù)作用的最佳濃度為10μg/ml。
　　結(jié)論:TNF-α與IL-32在一定程度上指示了膿毒癥的嚴(yán)重程度。阻斷TLR4信號(hào)通路可明顯降低LPS刺激下TH