間接競爭ELISA檢測TGEV方法的建立.pdf

1、本研究用經(jīng)Ni2+-NTA金屬螯合層析柱純化后獲得純化的重組N蛋白作為抗原檢測試劑，抗重組N蛋白的單克隆抗體作為抗體診斷試劑，用非離子去污劑暴露出TGEV的核衣殼蛋白，利用競爭原理針對糞便中的TGEV建立了一種快速的間接競爭ELISA檢測方法。并對方法中封閉液的選擇及工作條件進(jìn)行了確定，結(jié)果表明0.5％聚乙烯醇在37℃封閉2h效果最理想。該方法對感染TGEV的20頭份仔豬的糞便樣品進(jìn)行檢測，并用統(tǒng)計學(xué)方法對仔豬糞便樣品的檢測數(shù)據(jù)進(jìn)行了分

2、析，確定了陽性值判定標(biāo)準(zhǔn)為：在陰性對照(N)OD492nm＞0.9情況下，抑制率大于14.5％為陽性。特異性實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，建立的間接競爭ELISA對豬輪狀病毒、豬流行性腹瀉病毒等腸道病毒的檢測均為陰性反應(yīng)。 以TGEVTH-98株的強(qiáng)毒株人工口服感染未進(jìn)初乳的初生仔豬，24h后收集仔豬糞便樣品，用間接競爭ELISA和RT-PCR方法分別對糞便進(jìn)行病原體檢測，結(jié)果表明，在仔豬感染62h以后，用間接競爭ELISA方法可檢測到在腸道內(nèi)