RNA干涉對豬體細胞肌生成抑制素基因表達的影響.pdf

1、肌生成抑制素基因(myostatin，MSTN)是轉化生長因子-β(TGF-β)超家族的一員，研究表明，Myostatin基因在抑制骨骼肌的生長、調節(jié)脂肪的積累、肌肉衰竭和再生、骨折愈合等生理活動中都發(fā)揮著重要作用。 RNA干涉(RNAinterference，RNAi)是指由雙鏈RNA介導的mRNA的特異性降解反應，它首先在秀麗線蟲中被發(fā)現(xiàn)。相關于RNA干涉的一系列基因沉默現(xiàn)象已在真核王國中的許多物種中被發(fā)現(xiàn)。這一現(xiàn)象的主要效

2、應因子是被稱為小干涉RNA(siRNA)的、21-23bp長的雙鏈RNA分子。長的雙鏈RNA分子首先被一種RNA酶Dicer切割成siRNA，然后由這些小分子作為mRNA識別和切割的模板。RNA干涉將會成為哺乳動物基因功能研究的有力工具。 本研究建立了仔豬骨骼肌衛(wèi)星細胞和豬胎兒成纖維細胞體外培養(yǎng)體系，構建了抑制豬MSTN基因表達的干涉質粒。本實驗共選擇了3個豬肌生成抑制素基因的mRNA干涉位點，設計合成三對特異的寡核苷酸鏈和一對

3、非特異的寡核苷酸鏈，通過退火形成雙鏈后依次將其連入帶有U6啟動子的干涉載體psiSTRIKE上，得到含四個目的DNA片段的重組質粒。通過脂質體轉染的方法將重組干涉質粒，轉染仔豬骨骼肌衛(wèi)星細胞和豬胎兒成纖維細胞，并將其分為3組：實驗組、陰性質粒對照組和空白對照組。經(jīng)過G418篩選后用逆轉錄-聚合酶鏈式反應(RT-PCR)檢測仔豬骨骼肌衛(wèi)星細胞和豬胎兒成纖維細胞中肌生成抑制素基因mRNA表達的改變。經(jīng)RT-PCR檢測，實驗組中肌生成抑制素基