羊布魯氏菌M5株omp31-2基因原核表達(dá)載體的構(gòu)建及表達(dá).pdf

1、目的：構(gòu)建攜帶羊布魯氏菌M5株外膜蛋白OMP31-2編碼基因(omp31-2基因)的原核表達(dá)載體,誘導(dǎo)目的蛋白的表達(dá),為后續(xù)研究奠定一定的實驗基礎(chǔ)。
　　 方法：根據(jù)GeneBank公布的綿羊種布魯氏菌omlp31-2基因序列,設(shè)計PCR引物。以羊種布魯氏菌M5菌株基因組為模板,經(jīng)PCR方法擴(kuò)增目的基因,將目的基因與載體pMD19-T連接,得到重組質(zhì)粒pMD-omp31-2,分別采用PCR和酶切的方法鑒定重組質(zhì)粒。重組質(zhì)粒經(jīng)雙酶

2、切后,用T4 DNA連接酶將目的基因與原核表達(dá)載體pET32a連接,得到重組載體pET32a-omp31-2,IPTG誘導(dǎo)目的基因的表達(dá),SDS-PAGE電泳方法檢測表達(dá)產(chǎn)物。
　　 結(jié)果：(1)通過對omp31-2基因的測序表明:omp31-2基因含有723個bp,與國際標(biāo)準(zhǔn)菌株綿羊種(63/290)的omp31-2基因有6個bp不同,二者核苷酸序列同源性達(dá)99.76％；該基因與國際標(biāo)準(zhǔn)菌株羊種、犬種omp31-2基因核苷酸序