骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞局部注射聯(lián)合中藥外敷治療兔糖尿病足的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的:探討骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(BMSCs)局部注射聯(lián)合中藥外敷對(duì)新西蘭大白兔糖尿病足潰瘍的治療效果及其可能機(jī)理。
　　 方法:取新西蘭大白兔70只，體重2.0～3.0kg,雌雄不限，將新西蘭兔高糖高脂飼料喂養(yǎng)2個(gè)月，于（第1天、第4天、第7天）禁食6h后采用耳緣靜脈注射由無菌生理鹽水配制的2.5％四氧嘧啶50mg/kg，共3次，每天監(jiān)測(cè)血糖，第10天測(cè)空腹血糖＞11.1mmol/L入選模型，取入選模型新西蘭兔32只按不同的治療方法

2、將其隨機(jī)分成4組，每組8只動(dòng)物。隨機(jī)分為:對(duì)照組（A組），BMSCs移植治療組（B組），中藥治療組（C組），BMSCs移植聯(lián)合中藥治療組（D組），每組各8只;將4組實(shí)驗(yàn)用兔大腿部切除直徑15mm圓形區(qū)域全層皮膚，建立糖尿病足潰瘍模型。新西蘭大白兔糖尿病足潰瘍?cè)炷：竺刻烊庋塾^察創(chuàng)面愈合情況，記錄創(chuàng)面上皮完全覆蓋所需時(shí)間。造模后第0，4，8，12，16和20天，各組兔糖尿病足潰瘍創(chuàng)面用數(shù)碼相機(jī)拍照，經(jīng)圖像分析計(jì)算未愈合面積，計(jì)算創(chuàng)面愈合率，

3、比較各組潰瘍愈合情況。對(duì)各組做相應(yīng)處理15天后，沿超出創(chuàng)面外緣2毫米處取下創(chuàng)面組織利用HE染色、Masson染色光學(xué)顯微鏡下觀察觀察潰瘍創(chuàng)面愈合組織的細(xì)胞數(shù)量、新生血管及膠原纖維等組織結(jié)構(gòu);電子顯微鏡下觀察潰瘍愈合組織中成纖維細(xì)胞結(jié)構(gòu)和細(xì)胞周圍膠原沉積情況;采用RT-PCR法檢測(cè)糖尿病足潰瘍創(chuàng)面處皮膚組織bFGFmRNA表達(dá)。
　　 結(jié)果:1.大體觀察（創(chuàng)面愈合時(shí)間和愈合率）:A組潰瘍愈合緩慢，至20天時(shí)創(chuàng)面仍未完全上皮覆蓋，潰

4、瘍愈合率31％;B組創(chuàng)面完全上皮覆蓋所需時(shí)間平均天數(shù)為16天，潰瘍愈合率57％;C組創(chuàng)面完全上皮覆蓋所需時(shí)間平均天數(shù)為14天，潰瘍愈合率62％;D組愈合迅速，創(chuàng)面完全上皮覆蓋所需時(shí)間平均天數(shù)為11天，潰瘍愈合率76％。2.光學(xué)顯微鏡觀察:A組肉芽組織結(jié)構(gòu)松散不清晰，成纖維細(xì)胞數(shù)量較少，輪廓不清，散在分布;細(xì)胞外基質(zhì)較少，膠原纖維束稀疏、排列混亂，毛細(xì)血管較少。D組肉芽生長(zhǎng)迅速，大量成纖維細(xì)胞聚集成群，輪廓較清晰;細(xì)胞外基質(zhì)豐富，膠原纖維

5、束排列密集而有序，可見大量血管生成，組織分層愈合良好。B組、C組光學(xué)顯微鏡下結(jié)構(gòu)明顯優(yōu)于A組，但較D組差。3.電子顯微鏡觀察:A組成纖維細(xì)胞形態(tài)不規(guī)則，細(xì)胞內(nèi)容物少，周圍膠原纖維稀疏，排列混亂。B組、D組成纖維細(xì)胞體積大，形態(tài)完好，胞質(zhì)內(nèi)的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、線粒體、溶酶體、高爾基復(fù)合體等細(xì)胞器豐富，周圍可見大量膠原纖維，排列整齊、有序。C組細(xì)胞結(jié)構(gòu)及膠原沉積情況介于兩者之間。4.bFGFmRNA表達(dá)情況:D組明顯高于A組(p＜0.01)，B、C組